| | C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia | | | AVALIAÇÃO DAS POTENCIALIDADES BIOTECNOLÓGICAS DE ABOBRINHA Cucurbita pepo | | | Thâmara Machado e Silva 1 (autor) taminhafarma@hotmail.com | | Flavio Marques Lopes 2 (orientador) flaviomarques@latinoamericana.edu.br | | Kátia Flávia Fernandes 3 (co-orientador) katia@icb.ufg.br |
| | 1. Graduanda do Curso de Farmácia,Univer. Est. de Goiás-UEG | | 2. Prof Mestre da Fac. Latino Americana,FLA e Univer.Est. de Goiás,UEG | | 3. Prof.Dra.Depto de Ciências Biológicas, Univer.Fed.de Goiás,UFG |
| | INTRODUÇÃO:
Introdução: Enzimas são proteínas que catalisam as reações biológicas, acelerando várias reações metabólicas, sob condições fisiológicas de pH, temperatura, meio iônico, etc. Destas, destacam-se as peroxidases que, assim como as polifenoloxidases, pertencem ao grupo das oxidorredutases.A peroxidase na presença de peróxido de hidrogênio catalisa a oxidação de alguns substratos doadores de prótons como mono e difenóis, polifenóis, aminofenóis entre outros.A família das peroxidases reúne enzimas de fácil manuseio, utilizadas em laboratório de análises clínicas em dosagens bioquímicas (glicose, colesterol) e imunológicas (ELISA), além de estar em processos de controle de qualidade na indústria de laticínios e têxteis.O uso de extratos brutos e/ou tecidos vegetais pode apresentar em alguns casos, certa desvantagem na seletividade do método analítico; entretanto, são extremamente econômicos e geralmente possuem tempo de vida superior àqueles métodos que utilizam enzimas purificadas, visto que estas naturalmente imobilizadas nas células destes materiais biológicos (habitat natural) são mais estáveis e geralmente possuem o seu cofator disponível.Estudos têm revelado na abobrinha Cucurbita pepo uma fonte muito rica de peroxidase;comparados a outros vegetais como pêssego,mandioca, alcachofra, a abobrinhaCucurbita pepo apresenta uma quantidade de peroxidase bem maior. | | METODOLOGIA:
Metodologia: A extração da enzima foi feita com abobrinha Cucurbita pepo fresca, descascada, triturada em um liquidificador e filtrada em trama de nylon, com tampão acetato de sódio 0,1mol.L-1(pH 4,0-5,5) e fosfato de sódio 0,1mol.L-1 (pH 6,0-8,0), a 40C, para estudo do melhor pH. A atividade da peroxidase a 40C, congelada e a 250C, em pH=7,0, foi observada. A atividade em várias temperaturas foi vista com ensaios deixados por 10min em temperaturas de 250-900C. A atividade e estabilidade da peroxidase do extrato bruto (EB) foram vistas em diferentes substratos, como catecol segundo método de Halpin e Lee (1987), guaiacol 1%, orto-dianizidina segundo metodologia de Padiglia e cols. (1995), ABTS, segundo Arnao, MB, pirogalol conforme método de Halpin e cols. (1989). | | RESULTADOS:
Resultados: Nota-se que a atividade enzimática da peroxidase de Cucurbita pepo tendo catecol como substrato, apresenta-se alta e estável em tampão fosfato 0,1mol.L-1, pH 7,0.É interessante ressaltar que, tratando-se de extrato bruto vegetal e visto que a enzima não foi purificada, percebe-se também uma enzima capaz de atuar em meio ácido, com relevantes quantidades de unidades de enzima/mL em tampão acetato 0,1mol.L-1, pH 4,5. Extrato bruto de abobrinha mantido em diferentes condições de armazenamento mostrou possuir uma atividade enzimática estável e alta quando mantido a 250C (UE 3,34 UE /mL), apesar de que o armazenamento a 40C também mostrou-se favorável e estável. Analisando-se a atividade enzimática em uma faixa de temperatura variando de 250-900C, percebe-se uma atividade enzimática ótima, com cerca de 3,77 UE/mL a 250C, estando o extrato armazenado por 10min nestas condições.Percebendo-se a melhor temperatura a 250C, o tempo de armazenamento foi passado de 10min para 15min, chegando-se a 60min com uma atividade enzimática de 1,24 UE /mL.
Diante dos ensaios com diferentes substratos, percebe-se a eficácia da atividade enzimática frente ao reativo guaiacol (6,01UE/mL) | | CONCLUSÕES:
Conclusão: O extrato bruto de Cucurbita pepo mostrou-se extremamente viável como fonte de peroxidase, sendo, pois uma fonte de baixo custo, eficiente, de fácil obtenção e manuseio.Percebe-se, dos resultados, uma não utilização de inibidores de proteases para manter a sua estabilidade, que se manteve em 100% durante um mês de armazenamento, constatando a eficiência e estabilidade da enzima peroxidase obtida deste extrato. | | | | | Trabalho de Iniciação Científica | | | Palavras-chave: Cucurbita pepo; peroxidase; atividade enzimática. |
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Anais da 56ª Reunião Anual da SBPC - Cuiabá, MT - Julho/2004 |