| | C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 4. Genética Molecular | | | DNA RIBOSSOMAL NUCLEAR DE CURIMATIDAE (PISCES, CHARACIFORMES) COLETADOS NO RIO ARAGUAIA, COM ENFOQUE NA ESTRUTURA DO NTS DO GENE 5S E NO ITS2 DO CÍSTRON NUCLEOLAR | | | Ludier Kesser Santos Silva 1 (autor) kesser.ss@bol.com.br | | César Martins 3 (colaborador) cmartins@ibb.unesp.br | | Paulo Cesar Venere 2 (co-orientador) pvenere@uol.com.br | | Issakar Lima Souza 4, 5 (orientador) issakar.souza@bol.com.br |
| | 1. Bolsista PIBIC do Depto. de Ciências Biológicas e da Saúde do ICLMA/UFMT | | 2. Prof. Dr. do Depto. de Ciências Biológicas e da Saúde do ICLMA/UFMT | | 3. Prof. Dr. do Instituto de Biociências da UNESP, campus Botucatu SP | | 4. Prof. Dr. do Depto. de Ciências da UEM | | 5. Pesquisador DCR/CNPq do Depto. de Ciências Biológicas e da Saúde do ICLMA/UFMT |
| | INTRODUÇÃO:
Os curimatídeos compreendem um total de oito gêneros e cerca de 120 espécies distribuídas em toda a região neotropical. A maioria das 35 espécies dessa família revelaram um número diplóide 2n=54 e um par de cromossomos portadores das regiões organizadoras de nucléolos (RONs). Os rDNAs nucleares são seqüências gênicas que codificam os diferentes tipos de rRNAs que participam do ribossomo citoplasmático. O rDNA nucleolar é transcrito em rRNAs 18S, 5,8S e 28S pela RNApolI, e o rDNA 5S pela RNApolIII. Ambos genes organizam-se “in tandem”, os nucleolares localizados nas RONs, e o 5S em outras regiões do genoma. O gene para rRNA 5S possui 120pb altamente conservados, e é separado das repetições adjacentes por espaçadores não transcritos (NTSs), que possuem seqüências e tamanhos variáveis entre diferentes organismos. O rDNA nucleolar tem espaçadores transcritos internos (ITSs) que também não são conservados entre as espécies. Ambos espaçadores têm se revelado como bons marcadores populacionais e/ou espécie-específicos. Assim, objetivou-se estudar e comparar a estrutura desses genes em espécies de curimatídeos que ocorrem no Médio Araguaia, com enfoque nas porções NTS do 5S e nos ITSs do rDNA nucleolar. | | METODOLOGIA:
Para o presente estudo foram analisadas as seguintes espécies: Cyphocharax goldini (2 fêmeas), Curimatella imaculata (1 fêmea e 4 machos), Curimata cyprinoides (2 machos), Steindachnerina amazonica (1 fêmea), S. gracilis (1 fêmea). Os espécimes foram coletados no médio rio Araguaia, nas proximidades do município de Pontal do Araguaia MT. O método de extração e purificação de DNA procedeu-se a partir de tecidos sólidos, com proteólise, seguido de fenolização e precipitação do DNA genômico em etanol PA e frio. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para amplificar os segmentos de interesse: o 5S+NTS foi amplificado com o uso dos primers A (5’-TACGCCCGATCTCGTCCGATC-3’) e B (5’-CAGGCTGGTATGGCCGTAAGC-3’), e o segmento 5,8S+ITS2 com os primers I3 e I4. Para a visualização dos segmentos amplificados por essa técnica foi utilizado gel de agarose a 1%. As porções amplificadas foram visualizadas em gel corado com brometo de etídio exposto à luz ultravioleta em transiluminador UVP. Os segmentos amplificados foram purificados utilizando o GFX PCR DNA and gel band Purification kit (Amersham Biosciences). Após a purificação foi realizado o sequenciamento dos produtos correspondentes. | | RESULTADOS:
O uso de PCR para amplificação do rDNA 5S+NTS apontou produtos de aproximadamente 180pb em quatro das espécies submetidas a análise (Cyphocharax goldini, Curimatella imaculata, Steindachnerina amazonica e S. gracilis). Curimata cyprinoides apresentou um produto maior em relação às demais espécies, com banda de aproximadamente 300pb. Também foram detectadas bandas correspondendo, possivelmente, a unidades multiméricas das repetições. Foram obtidas as seqüências das espécies Curimatella imaculata e Curimata cyprinoides. A região codificante do gene 5S apresentou a mesma composição de bases nas duas espécies. No entanto, os NTSs mostraram-se distintos em tamanho e composição, com 154pb em Curimata cyprinoides e 61pb em Curimatella imaculata. O segmento obtido com o uso dos oligonucleotídeos I3 e I4, para amplificação do 5,8S+ITS2 do rDNA nucleolar de Curimata cyprinoides, foi de aproximadamente 800pb. | | CONCLUSÕES:
Através dos resultados obtidos foi possível verificar que o gene rRNA 5S é extremamente conservado entre as espécies analisadas (Curimatella imaculata e Curimata cyprinoides), corroborando aos resultados obtidos por vários autores em diferentes organismos. Por outro lado os NTSs apresentaram-se muito distintos, e esse resultado confirma a não conservatividade desse espaçador gênico. A espécie Curimatella imaculata apresentou repetições do rDNA 5S de 180pb, sendo o NTS constituído por apenas 61pb, o menor tamanho já observado em vertebrados. O estudo do gene 5S tem sido usado como marcador populacional, principalmente devido ao fato de que os NTSs sejam menos conservados entre as populações do que a porção transcrita. A obtenção de produtos de rDNA 5S de tamanhos distintos se deve ao fato de que o NTS apresenta uma alta taxa de mutação, diferente do observado para a região codificante 5S. Poucos são os relatos da estrutura do rDNA nucleolar em peixes neotropicais, e o presente trabalho contribui com a primeira descrição em Curimatidae, revelando que o ITS2 tenha aproximadamente 350pb, um tamanho esperado quando comparado a resultados obtidos por outros autores para peixes ósseos. | | | Instituição de fomento: CNPq (procs. 300151/01-2 e 552353/01-9) e UFMT | | | Trabalho de Iniciação Científica | | | Palavras-chave: rDNAs 5S e nucleolar; NTS e ITS2; Curimatidae. |
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Anais da 56ª Reunião Anual da SBPC - Cuiabá, MT - Julho/2004 |