Resumo: O cultivo de Pleurotus Ostreatus no Brasil e no mundo vem ganhando importância entre os principais cogumelos comestíveis cultiváveis comercializados como “Hiratake” e “Shimeji”. Entretanto, apesar do mesmo já ter sido cultivado em diferentes resíduos agrícolas a maioria das linhagens brasileiras necessitam de melhoramento genético. O presente trabalho foi realizado no laboratório de Genética de Microrganismos da Universidade Estadual de Londrina. Os biossólidos foram obtidos de fontes diversas, oriundos de diferentes localidades. Resíduos de casca de laranja (CL), casca de arroz (CA) e sabugo de milho (SBM) foram utilizados como substratos, visando à obtenção de biomassa micelial e de basidiocarpos de Pleurotus Ostreatus. Quatro repetições de cada substrato foram colocadas em sacos de polipropileno (500gr de substrato/saco), autoclavados, inoculados com cerca de 2g do inóculo e incubados a 25 ºC. Após a colonização, os sacos foram abertos e distribuídos aleatoriamente em câmara de crescimento para indução da frutificação. Os cogumelos foram colhidos, pesados e a eficiência biológica (EB) foi calculada em porcentagem, expressa em termos de peso fresco de cogumelos produzidos em relação ao peso seco do substrato inicial. Os dados foram submetidos à análise qualitativa visual em termos de produção comercial e em função das condições físico-químicas oferecidas. Os substratos contendo os resíduos CA e SBM apresentam potencial de produção de biomassa micelial e produção comercial de P. ostreatus. O sabugo de milho mostrou potencial para a produção de cogumelos apresentando uma eficiência biológica de 21,0%. Entretanto, é sugerido um melhoramento genético na linhagem empregada visando aumento na produtividade.