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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular |
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| ANÁLISE DA REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA DO GENE NtPMT1 ATRAVÉS DO USO DE PLANTAS TRANSGÊNICAS DE Nicotiana tabacum L |
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| Cristiane Paula Gomes Calixto , Ricardo Augusto de Oliveira Rodrigues , Jeanne Blanco de Molfetta , Andréa Carla Quiapin , Claudia Tomiko Otsu , Patrícia Marostica Vitorelli e Maria Helena de Souza Goldman |
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| Depto de Biologia; Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto - USP
, UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - USP |
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| O gene NtPMT1, que codifica uma proteína com alta similaridade às metiltransferases do ácido salicílico, é específico do pistilo de N. tabacum. Para se entender melhor essa regulação tecido-específico, o objetivo deste projeto é estudar a regulação da expressão do gene NtPMT1. Para tal, o promotor deste gene foi amplificado por PCR e clonado no vetor de plantas pPR97, acima da região codificadora do gene GUS. Esta construção (pCC1) foi confirmada por digestão com enzimas de restrição, inserida em Agrobacterium por eletroporação e utilizada para transformar discos foliares de N. tabacum. As plantas regeneraram na presença de canamicina. Diferentes órgãos vegetativos e reprodutivos foram coletados das plantas transgênicas e controle para extração de DNA e proteínas. Foram obtidas plantas transgênicas independentes, que foram levadas à casa de vegetação. Folhas de plantas transgênicas e 1 controle foram coletadas para extração de DNA genômico, confirmando a presença do transgene. Folhas, sépalas, pétalas, anteras, ovários e estigmas/estiletes das plantas transgênicas e controle foram coletados e usados para extração de proteína total. Os extratos foram analisados em ensaio fluorimétrico para detecção da atividade de GUS. Os resultados mostraram não haver diferença significativa na atividade de GUS entre plantas transgênicas e controle. O seqüenciamento do gene quimérico indicou que um códon ATG foi introduzido antes do códon ATG de início de tradução do GUS e fora de sua fase de leitura. A análise da expressão através do GUS foi impossibilitada pela introdução acidental de um códon ATG.
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Instituição de fomento: FAPESP e CNPq
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Trabalho de Iniciação Científica
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| Palavras-chave:
metriltransferase; promotor; GUS |
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Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005
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