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| C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada |
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| AVALIAR A METODOLOGIA DE HIBRIDIZAÇÃO LÍQUIDA DE ÁCIDOS NUCLÉICOS, PELA COMPARAÇÃO COM A PCR-DUPLEX, PARA A INCLUSÃO DESSA NOVA TÉCNICA NA ROTINA LABORATORIAL. |
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| André Ducati Luchessi , Rosário Dominguez Crespo Hirata e Mario Hiroyuki Hirata |
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| 1- Depto.de Analises Clínicas e Toxicológicas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo – FCF-USP.
, UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - USP |
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| A metodologia de hibridização de ácidos nucléicos consiste na captura específica dos produtos da PCR-duplex, marcados com biotina, por sondas específicas fixadas em placas de 96 orifícios, sendo revelados pelo conjugado streptoavidina / ALP / p-nitrofenilfosfato. Com os ensaios foi possível direcionar a amplificação do DNA do M. tuberculosis e do controle interno (CI), através de diferentes concentrações de DNA mantendo sempre o mesmo número de cópias do CI, analisados pela eletroforese em gel de agarose 1,0% e hibridização com detecção colorimétrica por ELISA.
Os resultados das analises dos produtos da PCR-duplex pela eletroforese em gel de agarose mostra a competitividade entre os dois moldes, os valores da densitometria de bandas do DNA e do CI são 893:437; 666:790; 498:957; 394:1122 e 936:850, sendo os limites de amplificação de 874:1130. Os dados da D.O. para a hibridização foram de 1,201: 1,052; 1,041: 1,008; 1,033: 1,149; 0,947: 1,037 e 0.956: 0.856, sendo os limites de amplificação de 1,506: 1,478. As correlações entre os dois métodos foram de 0.75 e 0.92 para o DNA e CI respectivamente.
Portanto a hibridização de ácidos nucléicos satisfaz as condições para a sua implantação em laboratórios de análises clínicas. Criando uma nova alternativa para o diagnóstico molecular do M. tuberculosis.
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Instituição de fomento: CNPq/PIBIC
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Trabalho de Iniciação Científica
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| Palavras-chave:
Diagnóstico Molecular; Tuberculose e Hibridização. |
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Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005
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