IMPRIMIR VOLTAR C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular Avaliação do papel do gene miniexon na virulência de Leishmania braziliensis A. F. J. Santos , J. S. Toledo , A. M. Silva , S. A. Antoniazi  e A. K. Cruz  Faculdade de Medicina de Riberão Preto da Universidade de São Paulo , UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - USP Os protozoários do gênero Leishmania são os agentes etiológicos das leishmanioses. Apesar da importância deste conjunto de doenças, são pouco compreendidos os fenômenos de virulência e tropismo que levam às diferentes manifestações das leishmanioses, de forma que os mecanismos moleculares relacionados à virulência do parasita são de grande interesse. Por isso vimos, em nosso laboratório, estudando diferentes aspectos da organização do genoma e sua expressão, e demonstramos que o gene Miniexon, central no processamento dos RNAs mensageiros de Leishmania, quando super–expresso por Leishmania major induz uma acentuada atenuação de sua virulência. A super-expressão deste gene foi obtida através da transfecção, em L.major, de um cosmídeo recombinante (32D05) que contém aproximadamente 100 cópias do Miniexon. Decidimos, a seguir, investigar se efeito de atenuação semelhante ocorreria em L. braziliensis, em função de sua importância epidemiológica em nosso país. Inicialmente foram transfectadas três linhagens de L. braziliensis com o mesmo recombinante utilizado em L.major e tendo como controle transfectantes com o cosmídeo sem inserto (cLHYG). Os transfectantes de L. braziliensis foram selecionados por sua resistência à droga de seleção (higromicina B - HYG) e submetidos a pressão crescente da droga para estimular a superexpressão dos genes do epissomo. A caracterização molecular dos transfectantes foi feita e a seguir investigamos o efeito da superexpressão do miniexon in vivo, em hamsters. O inóculo de 10 milhões de parasitas foi feito na pata direita traseira de cada animal e, para avaliar o desenvolvimento da lesão, por cinco meses foram feitas medidas semanais, com paquímetro, das patas inoculadas, tendo sempre como controle a pata contra-lateral. Cada grupo experimental foi composto por 10 animais infectados com as cepas: (1) selvagem, (2) transfectada com cLHYG, (3 e 4) transfectada com o 32D05 sob baixa (12 ug/ml de HYG) e alta pressão seletiva (120 ug/ml de HYG), respectivamente. Observou-se o desenvolvimento de lesões nos grupos controle (1 e 2), mas nos grupos infectados com o transfectante carregando o 32D05 nenhuma lesão ocorreu. Os dados obtidos permitem afirmar que o gene miniexon, quando superexpresso, possui a capacidade de atenuar também a virulência de L.braziliensis. Estamos avaliando o comportamento de outras linhagens da mesma espécie e investigando os possíveis mecanismos que levam à atenuação observada. Instituição de fomento: FAPESP Trabalho de Iniciação Científica Palavras-chave:  Avaliação; Pressão Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005