IMPRIMIR VOLTAR C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular NESTED-PCR PARA A AMPLIFICAÇÃO DO GENE NS5 DO VÍRUS DA HEPATITE C (HCV). Patrícia Soares Wyant 1, Claudiner Pereira de Oliveira 1, Regina Maria Santos de Amorim 1, Margareti Medeiros de Araújo 1 e Cláudia Renata Fernandes Martins 1 1-Departamento de Biologia Celular, Instituto de Biologia, Universidade de Brasília (UnB)., UNIVERSIDADE DE BRASÍLIA - UNB Introdução: O HCV, agente etiológico da Hepatite C, classificado em seis genótipos (1-6) e vários subtipos (1a, 1b, 2a, 2b, etc.), apresenta prevalência variável em diferentes regiões do mundo. No Brasil, os genótipos mais prevalentes são 1, 3 e 2, e no Distrito Federal (DF) 1 e 3. A determinação do genótipo de HCV infectando um indivíduo é importante para se avaliar o prognóstico da doença, o tratamento e para estudos epidemiológicos. O objetivo deste trabalho foi tentar otimizar os resultados da amplificação do gene NS5 por meio da técnica de nested-PCR. Metodologia: Foram estudadas quinze amostras, coletadas de doadores em bancos de sangue do DF com sorologia positiva e genotipadas em estudo anterior pela análise da região 5'UTR do genoma viral. O cDNA foi amplificado por nested-PCR, usando primers específicos para a região NS5. As amostras amplificadas foram analisadas em gel de agarose e seqüenciadas automaticamente. As seqüências foram analisadas pelo programa BLAST, usando o banco genômico de Los Alamos como referência. Resultados: Foi amplificado um fragmento de ~360pb, como esperado, para as quinze amostras. Estas foram seqüenciadas e, pela análise das seqüências, doze foram concordantes em genótipo e subtipo com os resultados de genotipagem obtidos anteriormente para a região 5'UTR, sendo cinco de subtipo 1a, uma de subtipo 1b e seis de subtipo 3a. Três amostras foram discordantes, duas de subtipo 1b pela análise de 5'UTR e subtipo 3a pela análise de NS5 e uma de subtipo 1b pela análise de 5'UTR e subtipo 1a pela análise de NS5. Conclusão: Usando nested-PCR obtivemos melhores resultados na amplificação das amostras, demonstrando que essa técnica é mais adequada para amplificação do genoma do HCV. Estudos relatam a importância de analisar-se mais de uma região do genoma viral para genotipagem do HCV. Nossos dados concordam com esses estudos confirmando a necessidade da análise de mais de uma região do genoma do HCV para que seja feita a genotipagem viral. Instituição de fomento: CNPq Trabalho de Iniciação Científica Palavras-chave:  HCV, nested-PCR, genotipagem; Gene NS5; Vírus da Epatite Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005