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| C. Ciências Biológicas - 13. Parasitologia - 5. Protozoologia de Parasitos |
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| TRANSFECÇÃO DE CEPAS DE TRYPANOSOMA RANGELI COM FORMAS LINEARES DO PLASMÍDEO PTEX-GFPMUT E ANÁLISE DA ESTABILIDADE DA TRANSFEÇÃO IN VITRO E IN VIVO. |
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| JANAYNA HAMMES DE ALMEIDA 1 e EDMUNDO CARLOS GRISARD 2 |
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| 1- Aluna do Curso de Biologia - UFSC
2- Profa. do Departamento de Microbiologia e Pararasitologia, Centro de Ciências Biológicas - UFSC, UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA - UFSC |
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| O Trypanosoma rangeli é um parasita da Ordem Kinetoplastida considerado inofensivo para seus hospedeiros mamíferos, entretanto patogênico para triatomíneos vetores. O desconhecimento do ciclo deste parasita em seus hospedeiros mamíferos motiva o desenvolvimento de ferramentas que auxiliem na localização do T. rangeli, como por exemplo o desenvolvimento de cepas transfectadas do parasita. Este trabalho objetivou transfectar, de forma estável, cepas de T. rangeli com formas lineares do plasmídeo pTEX-GFPmut, o qual contém o gene da proteína verde fluorescente (GFP). Para tanto, o plasmídeo pTEX-GFPmut foi produzido em larga escala, linearizado utilizando as enzimas de restrição, sendo o fragmento de interesse purificado para a transfecção. A transfecção foi inicialmente realizada com parasitas da cepa SC-58 em um sistema de eletroporação GenePulser na presença de 10 a 20ug de DNA plasmidial. Entretanto, não foram observados parasitas fluorescentes, e os mesmos não foram capazes de crescer na presença de droga seletiva (G-418), indicando a ineficiência do protocolo descrito. Com base na descrição em T. cruzi de um fragmento do promotor do RNA ribosomal conhecido como “segmento de recombinação”, foram desenhados novos iniciadores a fim de amplificar via PCR o fragmento homólogo em T. rangeli, objetivando inserí-lo no plasmídeo pTEX-GFPmut, visando sua integração. O fragmento de interesse foi amplificado e clonado no vetor pGEM-T Easy, sendo que os fragmentos estão sendo seqüenciados a fim de confirmar sua identidade. Como os iniciadores desenhados possuem sítios de restrição pré-definidos, após a identificação do clone de interesse o inserto será excisado e inserido no plasmídeo pTEX-GFPmut, o qual será utilizado em novos ensaios de transfecção do T. rangeli. Estes estudos estão em andamento e visam obter um vetor que possibilite uma expressão constitutiva da proteína verde fluorescente pelo T. rangeli. Suporte financeiro: CNPq e PIBIC/UFSC. |
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Instituição de fomento: CNPq
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Trabalho de Iniciação Científica
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| Palavras-chave:
TRYPANOSOMA RANGELI; TRANSFECÇÃO; GFP |
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Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005
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