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| E. Ciências Agrárias - 5. Medicina Veterinária - 5. Reprodução Animal |
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| CULTURA E CRIOPRESERVAÇÃO DE CÉLULAS DA GRANULOSA DE BOVINOS |
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| CAMILA CORTEZ 1, REGINALDO DA SILVA FONTES 1 e CARLA SOBRINHO PAES DE CARVALHO 1 |
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| 1 - Laboratório de Melhoramento Genético Animal - Setor Reprodução Animal - UENF, UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE DARCY RIBEIRO - UENF |
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| A padronização do cultivo de células da granulosa (CG), tem garantido grandes avanços para as biotecnologias da reprodução, principalmente a transferência nuclear; com o objetivo de se obter embriões de maior valor genético. O objetivo deste trabalho é comparar a integridade pós-descongelamento das CG de bovinos, congeladas com diferentes crioprotetores e descongeladas em meio de sacarose (SU). As CG foram obtidas de ovários coletados em matadouros. O fluido folicular com as CG foi lavado e filtrado. Os grumos das CG que ficaram retidas no filtro, foram lavados e colocados em cultivo (meio TCM 199) até a formação de uma monocamada. As CG da monocamada foram lavadas com PBS para a remoção de debris celulares e em seguida foram “tripsinizadas” (PBS + Tripsina 0,25% e EDTA 0,25%) por 3min a 37oC. As CG passaram por um dos tratamentos (DMSO) 10% dimetrilsulfóxido + 20min no gelo; (EG) 1,5M etilenoglicol por 1h a temperatura ambiente + 20min gelo e (TR) 50mM de trealose a 5min no gelo + 10min 37oC + lavagem + 20 min gelo. As CG foram estocadas em palhetas de congelamento e mantidas a –70oC. As palhetas foram descongeladas a 37oC e adicionadas em solução de 1,5M de SU por 10min; as CG foram lavadas e coradas com coloração azul de tripan, para avaliação da integridade. Os resultados encontrados para o número de CG com membrana íntegra e lesadas não diferiram significativamente para os grupos celulares tratados com os diferentes crioprotetores (30%, 35% e 31% para (DMSO+SU), (EG+SU) e (TR+SU) respectivamente para células lesadas) de acordo com o teste de ANOVA P<0,05. Esse resultado sugere que os crioprotetores atreves da metodologia aplicada, causaram lesão na membrana das CG; no entanto, experimentos preliminares realizados após o descongelamento indicam que esse tipo de lesão não torna as CG inviáveis para a adesão e multiplicação em placas de cultura, dessa forma as células são capazes de retomar ao cultivo. |
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Instituição de fomento: CNPq
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Trabalho de Iniciação Científica
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| Palavras-chave:
criopreservação; cultura; células da granulosa |
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Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005
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