IMPRIMIR VOLTAR C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 3. Biologia Geral PCR ESPECÍFICO E TRANSFECÇÃO DO GENE CONGF DE UMA LECTINA DE SEMENTES DE Canavalia grandiflora BENTH. EM VETOR PROCARIÓTICO Escherichia coli Clécia Cristina Barbosa Guimarães 1, Breno Luiz Melo Lima 1, Suiane Benevides Marinho 1, Ana Priscilla Melo Jardim 1, Sandra Maria Dias Moraes 2, Benildo Sousa Cavada 3, Thalles Barbosa Grangeiro 3 e Vânia Marilande Cecccatto 2 1 – Coordenação do Curso de Ciências Biológicas/UECE 2 – Prof. Dr. Curso de Ciências Biológicas/UECE 3 – Prof. Dr. Depto. Bioquímica e Biologia Molecular – UFC, UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ - UECE As lectinas formam uma classe de proteínas capazes de se ligar reversivelmente à mono ou oligossacarídeos. O DNA genômico de C. grandiflora foi obtido através da extração de folhas jovens, utilizando-se o método CTAB. O DNA genômico foi utilizado para a amplificação através da reação em cadeia da polimerase do gene da lectina de sementes, utilizando-se iniciadores já caracterizados para o gene homólogo ConBr. O gene ConGF, amplificado por esta metodologia, foi inserido por uma reação enzimática com T4 DNA ligase a um plasmídeo pGEM-T. O sistema ConGF/pGEM-T foi utilizado então para um ensaio de transfecção gênica com preparação de células competentes do vetor procariótico E. coli DH 5a. As bactérias transformadas foram selecionadas por sua capacidade de crescer em meio sólido LB seletivo contendo ampicilina 0,2 mg/ml e X-Gal 1mg/placa. Colônias brancas (recombinantes) e azuis (não recombinantes) são o resultado da transfecção. A inserção foi confirmada através da retirada do plasmídeo e PCR para visualização do produto amplificado, caracterizando o sucesso da transformação. A eletroforese em gel de agarose mostrou uma banda única de 23 Kb. O resultado da amplificação com iniciadores homólogos ao gene ConBR apresentou uma banda de 870 Kb, correspondente ao peso do gene homólogo, o qual também foi amplificado como controle positivo. Das colônias brancas obtidas, três clones apresentaram reação positiva, obtida através da presença de produto amplificado do gene ConGF. A possibilidade de utilização de iniciadores da reação em cadeia da polimerase para a amplificação do gene ConBr para a obtenção de genes homólogos de lectinas, em outras espécies da subtribo Diocleinae ocorre devido à grande homologia já observada entre estes genes. Esta possibilidade abre caminho para sua utilização como ferramenta no estudo molecular de lectinas de leguminosas. Instituição de fomento: FUNCAP, CNPq Trabalho de Iniciação Científica Palavras-chave:  Canavalia grandiflora; lectinas; Diocleinae Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005