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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular |
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| PROTEÍNAS DO APOPLASTO FOLIAR INDUZIDAS PELO FUNGO Crinipellis perniciosa, CAUSADOR DA VASSOURA-DE-BRUXA DO CACAUEIRO. |
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| Neuma Moreno dos Santos 1, Roberto Fabian Santos de Araújo 1, Kleiton Silva Borges 1, Joana Setúbal Brito 1, Júlio Cezar Mattos Cascardo 1 e Gonçalo Amarante Guimarães Pereira 2 |
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| - Depto.de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz – DCB/UESC – pirovani@uesc.br
2- Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas – IB/UNICAMP
3- Centro de Pesquisa do Cacau – CEPEC/CEPLAC
4- Almirante Cacau – M&M Mars
, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ - UESC |
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| A cacauicultura do sul da Bahia tem enfrentado sérios problemas devido ao fungo C. perniciosa(Cp), causador da doença vassoura-de-bruxa. Como patógeno hemibiotrófico, o Cp apresenta fase parasítica e fase saprofítica, provocando alterações histológicas, morfológicas e fisiológicas tecido e tempo-específicas no cacaueiro. A resposta do hospedeiro, localizada no ponto de infecção, resulta em considerável aumento de tecidos e desenvolvimento de ramos laterais. Essas respostas da planta parecem ser estimuladas pela fase primária ou parasítica (biotrófica). Sabe-se que um dos mecanismos de defesa das plantas ao ataque de patógenos é a secreção de proteínas PR para o apoplasto, resultando em modificações neste espaço. A extração de proteínas e outras macromoléculas do tecido de cacau é dificultada pela presença de goma, pigmentos e compostos fenólicos. Assim, objetivamos a extração de proteínas do apoplasto foliar de cacau para produção de anticorpos e para análise proteômica. O fluido apoplástico de plantas sadias e inoculadas com Cp foi extraído por imersão das folhas em água gelada, seguida de infiltração a vácuo e centrifugação. Para obtenção de extrato protéico o fluido foi concentrado por liofilização e submetido a extração fenólica. Extrato protéico total de folhas foi obtido por precipitação com TCA 10% em acetona, seguido de despigmentação com acetona gelada, ou por precipitação com TCA, seguido de extração fenólica. Anticorpos contra as proteínas do apoplasto foram produzidas em coelho e testados por westhern blot, mostrando-se efetivos em discriminar proteínas intercelulares no extrato protéico total. Esses anticorpos poderão ser empregados como sonda para o isolamento de genes expressos no apoplasto em resposta ao Cp. A eletroforese bidimensional indicou spots diferenciais no extrato protéico apoplástico de plantas inoculadas, portanto, a metodologia de extração fenólica de proteínas poderá ser empregada para a análise proteômica do espaço intercelular.
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Instituição de fomento: FAPESB, BNB, CNPq, UESC
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Trabalho de Iniciação Científica
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| Palavras-chave:
Proteômica; Interação planta-patógeno; Theobroma cacao |
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Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005
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