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| C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia | ||
| ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS ENDOFÍTICOS DE PARTES AÉREAS DE Borreria verticillata E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E ANTIOXIDANTE DE SEUS EXTRATOS. | ||
| Adrianna Kelly Santos da Silva 1 (adrianna_kss@yahoo.com.br), Maria Vladimilsa da Silva 1 e Luiz Carlos Caetano 1 | ||
| (1. Depto. de Química, Universidade Federal de Alagoas-UFAL) | ||
| INTRODUÇÃO:
Endofíticos são microrganismos que vivem no interior da planta hospedeira sem causar dano, podem ser isolados de tecidos vegetais desinfectados superficialmente. Por ocuparem um nicho ecológico semelhante àqueles ocupados por patógenos, os endofíticos apresentam grande potencial para o controle biológico (Hallman et al., 1997). A espécie Borreria verticillata (vassourinha-de-botão) são ervas rasteiras, anuais, perenes, erectas, comumente utilizada na medicina popular como antinflamatório (Alzugaray e Alzugaray, 1996). Seus constituintes químicos são alcalóides indólicos e bis-indólicos, iridóides e óleos essenciais, sendo que os alcalóides apresentam atividade contra bactérias gram-positivas e gram-negativas e fungos (Baldé et al. , 1989, Peixoto Neto et al. , 2002). Este trabalho tem por objetivo isolar microrganismos endofíticos de partes aéreas de Borreria verticillata e avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante de seu extrato obtido em acetato de etila. |
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| METODOLOGIA:
Partes aéreas da planta após esterilização superficial em álcool a 70% por 10s e solução de hipoclorito de sódio a 10% por 20min foram recortadas em fragmentos menores e transferidas para meio de cultivo agar-água (AA). Os microrganismos isolados foram transferidos para novos meios batata-dextrose-ágar (BDA) ou levedura-manitol-ágar (LMA) e para aumento de biomassa foi utilizado o meio batata-dextrose (BD). O controle foi realizado com alíquotas de 400µL da água da última lavagem e semeadas em meio BDA. O material foi incubado a 28-370C por até uma semana. O não crescimento de microrganismo revelou ausência de epifíticos. O microcultivo dos fungos endofíticos foi realizado através esfregaço do fungo endofítico em lâmina contendo 100μL de meio BDA colocada em de placa de Petri contendo AA para criar atmosfera úmida, em seguida lacradas com fita PVC. O teste da atividade antimicrobiana do extrato em acetato do meio de cultura do fungo endofítico foi executado de acordo com a metodologia de difusão em ágar (Lima et al., 2002). Os meios de cultura dos fungos (500mL) após filtragem em camada tripla de gaze foram extraídos com acetato de etila (1L) que após eliminação do solvente sob pressão reduzida forneceu 0,2g de extrato em acetato de etila. O extrato obtido foi dividido em duas partes iguais. Uma parte foi submetida à cromatografia em camada fina de sílica tendo como eluente, ora mistura de clorofórmio: metanol: amônia (80:20:2) e ora acetato de etila. Após eluição, as placas de sílica foram reveladas com sulfato cérico, reagente de Dragendorff e, mergulhada por 10 segundos em solução reagente de DPPH (difenilpicrilhidrazila) para avaliação da atividade antioxidante. Para cada reagente foi utilizada uma placa diferente. A atividade contra cepas de Staphylococcus aureus foi efetuada através do método de difusão em agar utilizando-se 100g do extrato dissolvidos em 40µL de solução metanol:água (3:7). O controle foi realizado com metanol:água (3:7). |
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| RESULTADOS:
Isolamento de bactérias endofíticas: Foram isolados quatro tipos de colônias de bactérias endofíticas denominadas de BvEb1, BvEb2, BvEb3 e BvEb4. Todas distintas no aspecto de coloração, sendo uma colônia seca e as demais de aspecto mucóide quanto ao crescimento no meio utilizado. A caracterização das culturas puras foi através da coloração de Gram, e demonstrou tratar-se de bactérias gram-negativas e morfologia sugestiva de bacilos. Isolamento de fungos endofíticos: foi isolado apenas um fungo denominado de BvEf1, que apresentou coloração branca com bordas proeminentes e de aspecto cotonoso. Para melhor visualização das hifas, o microcultivo foi realizado e analisado em microscópio óptico. Atividade antibacteriana do extrato em acetato de etila do filtrado da cultura do fungo endofítico: O extrato mostrou atividade contra Staphylococcus aureus. O halo de inibição do crescimento da bactéria foi de 15mm. O controle não apresentou halo de inibição. Análise química cromatográfica em gel de sílica do extrato do fungo: O extrato obtido foi revelado pelos seguintes reagentes de: Dragendorff, sulfato cérico e pelo DPPH. A placa cromatográfica revelada com Dragendorff mostrou a presença de prováveis alcalóides. A placa revelada com sulfato cérico revelou a presença de vários compostos nos sistemas eluentes utilizados. A placa revelada com DPPH apresentou manchas claras demonstrando ação antioxidante das substâncias eluídas presentes no extrato. |
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| CONCLUSÕES:
Em ramos de Borreria verticillata foram isolados quatro bactérias do tipo Gram negativa, e um fungo que não pode ser identificado por não apresentar estruturas de frutificação utilizando a técnica do microcultivo. O extrato em acetato de etila do filtrado da cultura apresentou atividade contra Staphylococcus aureus, e atividade antioxidante frente ao DPPH. O mesmo extrato em acetato de etila apresentou reação positiva ao reagente de Dragendorff havendo possibilidade do mesmo apresentar compostos alcaloídicos. |
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| Instituição de fomento: FAPEAL e PIBIC | ||
| Trabalho de Iniciação Científica | ||
| Palavras-chave: Microrganismos endofíticos; Borreria verticillata; Antioxidante. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |