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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia | ||
| IMOBILIZAÇÃO DE UMA β-N-ACETILGLUCOSAMINIDASE EXTRAÍDA DO CRUSTÁCEO Artemia franciscana EM DACRON FERROMAGNÉTICO | ||
| Pablo de Castro Santos 1 (pablocs@ufrnet.br), José Edilson Gomes Júnior 1, Ádila Lorena Morais Lima 1, Robério Medeiros do Nascimento 1, Luciana Duarte Martins da Matta 1 e Luiz Roberto Diz de Abreu 1 | ||
| (1. Departamento de Bioquímica, Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN) | ||
| INTRODUÇÃO:
Os Glicosaminoglicanos são compostos constituídos por hexosaminas (glucosamina ou galactosamina) e ácidos urônicos (glucurônicos ou idurônicos) apresentando, geralmente, sulfatação em suas estruturas. São compostos encontrados em todos os filos do reino animal que apresentam organização tissular. Suas funções estão relacionadas ao controle de água e eletrólitos, ação anticoagulante, resistência à infecção, divisão e crescimento celular, dentre outras. O objetivo deste trabalho é imobilizar a enzima β-D-N-acetilglucosaminidase a fim de utilizá-la como ferramenta para a elucidação da estrutura química de glicosaminoglicanos extraídos de invertebrados. |
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| METODOLOGIA:
Uma β-D-N-acetilglucosaminidase foi extraída do crustáceo Artemia franciscana e purificada com sulfato amônio (F-0-30%) e cromatografia de gel filtração em Biogel 1,5 A. As folhas de Dacron foram cortadas em pequenos pedaços e adicionado hidrato de hidrazina por 16 h sob agitação até que este se transformasse em pó. O processo de magnetização deu-se pelo método de co-precipitação com cloretos ferroso e férrico após alcalinização da suspensão do pó de Dacron. O Dacron magnetizado assim obtido foi ativado com glutaraldeído em pH 5,0; 7,0 e 9,0 antes do processo de imobilização para identificação do melhor pH para a ativação do suporte. As atividades das enzimas imobilizadas aos suportes ativados a diferentes pHs também foram testadas, utilizando-se o p-Nitrofenil β-D-N-acetilglucosaminídeo como substrato. A melhor atividade enzimática obtida foi utilizada para o teste de reutilização da enzima, onde a enzima foi reutilizada por 10 vezes seguidamente. |
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| RESULTADOS:
A enzima foi imobilizada em Dacron (Polietilenotereftalato-PET) ferromagnético com retenção de proteína de 2,0 mg/mg de suporte, rendendo um derivado insolúvel contendo 5,0 unid/mg de proteína e retendo 10,35 % da atividade da enzima solúvel. 100% de imobilização foi obtida quando o Dacron ferromagnético foi ativado com glutaraldeído a pH 5,0, enquanto a pH 9,0 somente 36% de imobilização foi obtida. Testes de atividade foram realizados com as enzimas imobilizadas e maior atividade foi obtida quando o suporte foi ativado com o glutaraldeído em pH 5,0. Estas enzimas imobilizadas puderam ser reutilizadas por 10 vezes seguidas sem perda de atividade. |
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| CONCLUSÕES:
Estes resultados mostraram que o melhor pH para a ativação do Dacron ferromagnético com o glutaraldeído é 5,0, como ainda é neste pH de ativação que a enzima apresentou maior atividade. A enzima imobilizada foi reutilizada por 10 vezes seguidas indicando seu uso potencial para a hidrólise de glicosaminoglicanos específicos e identificação de suas estruturas químicas |
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| Instituição de fomento: Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN | ||
| Trabalho de Iniciação Científica | ||
| Palavras-chave: Imobilização de Enzimas; β-D-N-acetilglucosaminidase; Estrutura de Glicosaminoglicanos. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |