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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia | ||
| IDENTIFICAÇÃO DE GLICOSIDASES E PURIFICAÇÃO PARCIAL DE UMA β-D-FUCOSIDASE DO INVERTEBRADO MARINHO Artemia franciscana | ||
| Robério Medeiros do Nascimento 1 (roberio_nascimento@hotmail.com), José Edilson Gomes Junior 1, Pablo de Castro Santos 1, Adila Lorena de Moura Lima 1, Luciana Duarte Martins da Matta 1 e Luiz Roberto Diz de Abreu 1 | ||
| (1. Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN) | ||
| INTRODUÇÃO:
As glicosidases são moléculas protéicas responsáveis pela hidrólise de glicosídeos O-, N- e S- ligados, estando desta forma diretamente envolvidas no catabolismo de polissacarídeos e gliconjugados. Seu estudo constitui importante contribuição para o esclarecimento das características estruturais dos carboidratos. A presença de glicosidases já foi encontrada em muitos organismos, tais como invertebrados, bactérias, mamíferos e fungos. Este trabalho, tem como objetivo identificar a presença de glicosidases e purificação parcialmente uma β-fucosidase do crustáceo Artemia franciscana. |
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| METODOLOGIA:
Aproximadamente 2 kg deste invertebrado foi homogeneizado com dois volumes de tampão acetato de sódio 0,1M, pH 5,0 e centrifugado. O sobrenadante foi fracionado com saturações crescentes de sulfato de amônio. Os precipitados obtidos, foram denominados F-I, F-II e F-III. Após solubilização e diálise contra o mesmo tampão, a fração com maior atividade foi submetida a cromatografia. Para verificar a presença de glicosidases, nós usamos como substrato p-nitrofenil derivados de açúcar. |
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| RESULTADOS:
Detectamos atividade de β-fucosidase em todas as frações (F-I, F-II e F-III). A F-I, por ser uma das maiores atividades específica foi seqüencialmente purificada utilizando-se cromatografias de Bio Gel 1.5 A, DEAE-Biogel e Hidroxiapatita. A β-fucosidase foi purificada 46268,0 vezes com recuperação final de 47,81%. Uma α-fucana isolada da Spatoglossum schroederi, uma fucana comercial isolada de Fucus vesiculosus e o p-nitrofenil-α-L-fucopiranosídeo não foram degradados pela β-fucosidase, indicando a alta especificidade desta enzima. |
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| CONCLUSÕES:
Foram identificadas diversas atividades glicosidasicas no extrato protéico de Artemia franciscana, dentre elas a b-fucosidásica como uma das maiores atividades especificas, a enzima foi purificada 46268 vezes com rendimento de 47,81% e todas as cromatografia mostraram-se bastante eficientes, A β-D-fucosidase, não possui atividade sobre as ligações α-L-fucose das fucanas testadas, assim como não tem atividade sobre o p-nitofenil-α-L-fucopiranosídeo. |
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| Instituição de fomento: Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN | ||
| Trabalho de Iniciação Científica | ||
| Palavras-chave: Purificação de Proteína; Glicosidase; β-D-fucosidase. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |