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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas | ||
| ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO PARCIAL DE UMA LECTINA DO ECHINODERMA IRREGULAR Mellita quinquiesperforata | ||
| Norberto de Kássio Vieira Monteiro 1 (norbertokv@gmail.com), Gioconda Emanuella Diniz de Dantas Moura 1, Alexandre Flávio Silva de Queiroz 2, Raniere Mata Moura 2, Fabiano de Moura Teixeira 1, Anne Shyrley Ferreira Dias 1, Jannison Karlly Cavalcante Ribeiro 1, Adeliana Silva de Oliveira 1, 3, Elizeu Antunes dos Santos 1 e Maurício Pereira de Sales 1 | ||
| (1. Depto. Bioquímica, CB - Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN; 2. Depto. de Biofísica e Farmacologia - CB, Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN; 3. Depto. de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará - UFC) | ||
| INTRODUÇÃO:
As lectinas são proteínas ubíquas, encontradas em eucariotos, procariotos e vírus, que reconhecem e se ligam de forma reversível a carboidratos específicos. Em vertebrados e invertebrados, essas proteínas parecem estar envolvidas nos mecanismos de defesa destes. Muitas lectinas encontradas na hemolinfa de invertebrados parecem agir como a primeira linha de defesa do organismo, a partir do reconhecimento, ligação e neutralização de patógenos. Como exemplos, podemos citar as lectinas que reconhecem a -1,3-glucana de várias origens, e através dela sendo capaz de detectar a presença de leveduras ou bactérias (Kilpatrick, 2000); as taquilectinas do caranguejo japonês (Kawabata & Iwanaga, 1999); e a bateria de lectinas estruturalmente não relacionadas da barata (Wilson & Chen, 1999). Lectinas com função de defesa não são restritas a invertebrados. Em animais superiores, incluindo humanos, existe colectinas (Kilpatrick, 2002), ficolinas (Lu et al., 2002) e os receptores de membrana do macrófago (East & Isacke, 2002), todos estes reconhecem e promovem diretamente a eliminação de patógenos. A bolacha de praia (Mellita quinquiesperforata), animal utilizado neste trabalho pertence a classe Echinoidea. Na literatura, até o momento, nenhum trabalho de detecção e isolamento de lectinas do grupo de echinodermas foi mencionado. Este trabalho torna-se uma ponte de uma história evolutiva e serve como base para estudos em invertebrados do mesmo grupo ou aproximados. |
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| METODOLOGIA:
Cerca de 50 animais foram pesados, triturados e extraídos em tampão Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, por 2 horas. O extrato protéico bruto obtido foi fracionado seriadamente a 0-30%, 30-60% e 60-90% de saturação com sulfato de amônio. As frações F30, F60 e F90 obtidas foram submetidas a ensaios de hemaglutinação contra eritrócitos humanos (sistema ABO) não tratados e tratados com papaína, tripsina e neuraminidase. Ensaios de inibição da atividade hemaglutinante com mono, dissacarídeos e glicoproteínas foram realizados. Proteínas com atividades lectínicas foram detectadas nas três frações. |
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| RESULTADOS:
A F60 que apresentou maior título de hemaglutinação (128 UH) e especificidade para mucina. A lectina foi isolada por cromatografia de gel-filtração em Sephacryl S300 e cromatografia de afinidade Mucina-Sepharose 4B. A lectina, denominada MEL-I, quando submetida à eletroforese em gel de poliacrilamida a 7,5% na presença de SDS apresentou massa molecular relativa de 60 kDa. A MEL-I foi Ca++ e Mg++ dependente, termoestável até a temperatura de 40°C e mucina/glicosamina específica. Em ensaio aglutinação de células, esta proteína foi capaz de reconhecer e aglutinar formas promastigotas de Leishmannia chagasi. |
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| CONCLUSÕES:
1. As frações protéicas F30, F60 e F90 do Echinoderma irregular Mellita quinquiesperforata apresentaram atividades lectínicas. 2. Uma lectina, denominada de MEL-I foi purificada a partir da fração F60. 3. MEL-I apresentou as seguintes características: dependência por íons metálicos, especificidade pela glicoproteína Mucina e termoestabilidade até 40 oC. Em condições desnaturantes MEL-I apresentou massa molecular de aproximadamente 60 kDa. 4. A lectina MEL-I apresentou a capacidade de aglutinar Leishmannias coradas com coomasie blue. |
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| Instituição de fomento: CAPES, CNPq | ||
| Trabalho de Iniciação Científica | ||
| Palavras-chave: Lectinas; Echinoderma; Defesa. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |