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| C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. Bioquímica | ||
| FRACIONAMENTO DA PEÇONHA DE Bothrops neuwiedi pauloensis E DETERMINAÇÃO DAS ATIVIDADES COAGULANTE, FIBRINOGENOLÍTICA E FOSFOLIPÁSICA A2 DAS FRAÇÕES ISOLADAS. | ||
| Carolina de Freitas Oliveira 1 (carolina_udi@yahoo.com.br), Daiana Silva Lopes 1, Luiz Antônio Moreli Filho 1, Amélia Hamaguchi 1, Maria Inês Homsi-Brandeburgo 1 e Veridiana de Melo Rodrigues Ávila 1 | ||
| (1. Instituto de Genética e Bioquímica - UFU) | ||
| INTRODUÇÃO:
Cerca de 80% a 90% dos acidentes ofídicos ocorridos em Minas Gerais são ocasionados por serpentes do gênero Bothrops, conhecidas popularmente como jararacas. Estas serpentes apresentam um par de dentes especializados nos dois ossos maxilares, os quais conduzem a peçonha, usada para matar e iniciar a digestão. O índice de letalidade ocasionado pelos acidentes botrópicos é baixo. Entretanto esses acidentes resultam em seqüelas permanentes, já que o envenenamento botrópico pode levar a alterações cardiovasculares, coagulação intravascular, choque hipovolêmico e efeitos locais como dor, edema, necrose e hemorragia. Proteases, hemorraginas, fatores coagulantes e anticoagulantes, fosfolipases A2 e miotoxinas são os principais componentes da peçonha responsáveis pelo envenenamento botrópico. O presente trabalho teve como objetivo o fracionamento da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensis e a identificação das frações com atividades coagulante, proteolítica e fosfolipásica A2. |
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| METODOLOGIA:
Cerca de 200mg da peçonha bruta foram submetidos a uma cromatografia de filtração em Sephadex G-75, equilibrada com tampão bicarbonato de amônio 0,05M pH 7,8 e eluída com o mesmo tampão. O perfil cromatográfico foi traçado, obtendo-se cinco frações designadas como N1 a, N1b, N2, N3 e N4. As frações foram diluídas em tampão PBS e a dosagem de proteínas realizada pelo método do Microbiureto. Em seguida foram testadas as atividades coagulante, proteolítica e fosfolipásica A2 para todas as frações. Para a atividade coagulante, amostras em triplicata contendo 10µg de proteínas foram aplicadas em 200µl de plasma bovino e incubadas à 37ºC. A atividade é caracterizada pelo imediato aparecimento da rede de fibrina. A atividade proteolítica foi realizada sobre o fibrinogênio bovino, uma glicoproteína dimérica caracterizada por possuir 3 cadeias (Aα, Bβ e γ), adicionando-se 10µg de cada amostra a 50µl de solução de fibrinogênio (1,5mg/ml), incubando-se por 1 hora a 37ºC. Em seguida as amostras foram analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida a 14%, com agentes desnaturantes. A atividade fosfolipásica A2 foi determinada por titulação potenciométrica dos ácidos graxos liberados enzimaticamente com solução de NaOH 0,1208N, utilizando-se gema de ovo como substrato. O tempo de reação foi durante 3 minutos à temperatura ambiente. |
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| RESULTADOS:
Apenas a fração N1b apresentou atividade coagulante. As frações N1 a e N1b degradaram a cadeia Aα do fibrinogênio, enquanto a fração N2 degradou as cadeias Aα e Bβ. A fração N2 apresentou 67,8µeq/min/mg e a N3, 101µeq/min/mg, enquanto as frações N1 a, N1b e N4 não apresentaram atividade fosfolipásica A2. |
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| CONCLUSÕES:
Este estudo possibilitou a classificação das frações da peçonha bruta de Bothrops neuwiedi pauloensis de acordo com suas atividades, abrindo caminho para posteriores isolamentos das proteínas de cada fração, as quais poderão ser utilizadas como ferramentas em outras áreas do conhecimento. |
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| Instituição de fomento: UFU, CNPq e CAPES | ||
| Palavras-chave: Bothrops; Peçonha de serpentes; Fracionamento. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |