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C. Ciências Biológicas - 11. Morfologia - 4. Embriologia

PAPEL MODULADOR DE GLICOPROTEÍNAS NA ATIVIDADE MIGRATÓRIA DE CÉLULAS GERMINATIVAS PRIMORDIAIS

Priscila Tavares Guedes ¹ (priscilafertilita@terra.com.br), Tiago Dutra Pereira Ramos ¹, Fernanda Silva Guerra ¹, Fernanda Santos Rodrigues Araújo ¹, Elenice Maria Francisco da Silva ¹, Lucélia Flôr Bento ¹, Danielle Silva dos Santos ¹, Simone Gleide Bosares ¹, Luiz Carlos Nogueira ¹ e Terezinha de Jesus Sirotheau Corrêa ¹

(1. Departamento de Morfologia/ Instituto Biomédico/ Universidade Federal Fluminense-UFF)

INTRODUÇÃO:
Na morfogênese gonadal dos vertebrados, é necessário que as células germinativas primordiais (CGP) migrem por uma rota bem definida até alcançar as cristas gonadais, originando os futuros gametas. A migração de CGP, em embriões de aves, ocorre em três etapas distintas. Durante a primeira, a etapa de separação, as CGP se desprendem do hipoblasto. Na segunda etapa, a de migração, elas penetram nos vasos sanguíneos que se formam ao seu redor e, após migrarem passivamente pela corrente sangüínea (CGP circulantes), deixam os capilares e alcançam o mesênquima, onde migram ativamente (CGP teciduais) e se destinam à futura região gonadal. Por fim, na terceira etapa, a de colonização, as CGP alcançam e povoam as cristas gonadais.Caso as células não migrem no período embrionário, esta anomalia poderá ocasionar a formação de um animal infértil. Evidências sugerem que os componentes da matriz extracelular podem ser responsáveis por definir a rota e o padrão de migração de CGP. Glicoproteínas, tais como o colágeno tipo IV, a fibronectina, a laminina e a tenascina, foram encontradas na rota migratória das CGP de aves. No presente trabalho, analisou-se a participação das glicoproteínas da matriz extracelular, de forma seletiva, durante a migração de CGP em embriões de aves, visando a melhor elucidação dos mecanismos celulares e moleculares de doenças relacionadas à fertilidade, bem como ao seu prognóstico.

METODOLOGIA:
Embriões de Gallus gallus domesticus L., dos estádios 4 a 30 (Hamburger & Hamilton, 1951– H&H), foram fixados em solução fixadora de methacarn e estadiados. Durante a metade do período de fixação, cortes transversais, em diferentes níveis, foram realizados de acordo com a rota migratória das CGP: entre os estádios 4-14, na região do crescente germinativo; entre os estádios 15-18, posterior às artérias onfalomesentéricas e entre os estádios 19-30, próximo à porção cefálica dos membros inferiores. Em seguida, os embriões foram processados e incluídos em Paraplast (Produto Merck, no. 1.11609). Utilizou-se a técnica histoquímica do ácido periódico-reativo de Schiff (PAS) para demonstrar as CGP (em virtude do glicogênio citoplasmático) e revelar, de forma seletiva, a presença de glicoproteínas durante a rota migratória de CGP. Controles foram realizados, a partir da digestão prévia à diastase, sendo o glicogênio digerido, enquanto as glicoproteínas, diastase-resistentes, permanecem expressas na matriz.

RESULTADOS:
Através da técnica histoquímica, a morfologia das CGP pôde ser descrita: células grandes, redondas ou com irregularidades na membrana plasmática, núcleos geralmente excêntricos e grânulos de glicogênio na cor magenta. Durante a etapa de separação, quando um grande número de CGP pôde ser detectado no hipoblasto da região do crescente germinativo (estádios 5 e 7 de H&H), foram positivas tanto na membrana basal como no restante da matriz do hipoblasto. Tais células puderam ser encontradas, por volta do estádio 11 de H&H, no interior dos vasos sangüíneos extra-embrionários em formação. Em estádios mais avançados da migração, durante o estádio 17, quando muitas CGP deixam os vasos sangüíneos intra-embrionários e alcançam o interstício do mesoderma esplâncnico, observou-se fraca positividade na matriz extracelular do mesoderma. Quando o mesentério dorsal se forma (estádio 19 de H&H), as CGP foram notadas nesta região e nas cristas gonadais. Positividade da reação ao PAS foi fraca na matriz do mesentério dorsal, do ângulo celômico e das cristas gonadais, e moderada na membrana basal do epitélio destas regiões. Esta reação foi gradativamente aumentada, à medida que estas células colonizam as cristas gonadais (estádio 21 de H&H), tornando-se fortemente positiva nas gônadas em desenvolvimento (estádio 26 e 30 de H&H).

CONCLUSÕES:
Vários autores têm documentado a importância do papel desempenhado pela matriz extracelular no processo de migração durante o desenvolvimento embrionário. Tal influência moduladora deriva do fato de que a interação célula-matriz, fornece as condições adequadas para que a célula modifique a sua forma, inicie o movimento ou se diferencie. No presente estudo, realizado com a técnica do PAS, verificou-se que nas diferentes etapas da migração de CGP ocorre a presença de glicoproteínas na membrana basal e no interstício mesenquimal, o que se intensifica com um maior número de CGP migrando e colonizando as gônadas que desenvolvem. Estes resultados estão de acordo com Urven e colaboradores (1989), que utilizando métodos imuno-histoquímicos revelaram a presença do colágeno tipo IV, da fibronectina e da laminina, quando as células saem dos vasos sangüíneos e migram por entre as células mesenquimais e, marcaram também, a presença de fibronectina e laminina na membrana basal das cristas gonadais, naqueles mesmos estádios por nós observados. Também, estão de acordo com Anstrom & Tucker (1996), que comprovaram o papel modulador da tenascina-C durante o início da etapa de migração intersticial de CGP. Diante do exposto acima, nossos resultados sugerem que as glicoproteínas da matriz extracelular desempenham um papel modulador na atividade migratória de CGP e no desenvolvimento gonadal, embora os mecanismos envolvidos neste processo, ainda não estejam bem elucidados.

Instituição de fomento: CAPES, CNPq /PROPP/UFF

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: Glicoproteínas; Células germinativas primordiais; Embriões de Gallus.

Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005