|
||
| C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 4. Genética Molecular | ||
| CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE PLANTAS DE FUMO (Nicotiana tabacum Var. Xanthi) TRANSFORMADAS COM O GENE DA LECTINA DE Canavalia brasiliensis (ConBr) | ||
| Tuana Oliveira Correia 1 (tuana.oliveira@gmail.com), Sandra Mara Serafim Ribeiro 1, Thalles Barbosa Grangeiro 2 e Cristina Paiva da Silveira Carvalho 1 | ||
| (1. Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual do Ceará - UECE; 2. Departamento de Biologia, Universidade Federal do Ceará - UFC) | ||
| INTRODUÇÃO:
A ConBr é uma lectina tetramérica, que se liga a resíduos de glucose/manose, extraída a partir de sementes da leguminosa Canavalia brasiliensis. Trata-se de uma proteína que tem afinidade por oligo e polissacarídeos específicos e apresenta a capacidade de mediar uma variedade de processos biológicos, como indução da resposta imune, produção de citocinas, indução da produção do interferon-gama, entre outras. A ConBr apresenta ainda atividade anti-nutricional contra uma variedade de espécies de afídeos, apresentando efeito inseticida. A produção de plantas transgênicas expressando genes de lectinas apresentam um grande potencial biotecnológico para a agroindústria e indústria farmacêutica. No entanto, em função do complexo processamento pós-traducional que algumas lectinas sofrem, a exemplo da ConBr, faz-se necessário saber se estas lectinas podem ser processadas em sistemas heterólogos. Um interessante modelo para estudo de expressão heteróloga em vegetais é o fumo (Nicotiana tabacum), em função da sua capacidade de regeneração in vitro. |
||
| METODOLOGIA:
No presente trabalho, plantas de fumo transformadas com os genes conbr e conbrK (gene conbr juntamente com a seqüência Kozac, que, ao que tudo indica, é responsável pelo aumento da expressão do gene) e plantas controle não transformadas, foram propagadas por segmento nodal em meio MS (sais e vitaminas MS, sacarose 3,0 %, ágar 0,7 %, pH 5,8) contendo canamicina 100 mg/L (nas plantas transformadas). Os explantes in vitro foram transferidos para tubos de ensaio contendo meio MS líquido (sais e vitaminas MS, sacarose 3,0 %, pH 5,8), adiciondado de canamicina 100 mg/L nos tratamentos transgênicos. Após cerca de duas semanas, as plantas dos tubos foram aclimatadas em casa de vegetação para a obtenção da primeira geração (F1). As sementes coletadas foram semeadas em meio MS (sais e vitaminas MS, sacarose 3,0 %, ágar 0,7 %, pH 5,8) adicionado de canamicina 150 mg/L. As plantas das gerações T0 e T1 tiveram suas folhas coletadas e seu DNA foi extraído para a confirmação da presença do gene conbr. Foi feita, ainda, a preparação de extratos para análise da expressão protéica por SDS-PAGE e Western Blotting. |
||
| RESULTADOS:
A eletroforese em gel de agarose 1,0 % (contendo 0,5 μg/mL de brometo de etídio) dos produtos de PCR amplificados com iniciadores específicos para o gene conbr das plantas das duas gerações, confirmou a transformação das plantas de fumo e a transferência do gene para a primeira geração de plantas. Dos clones analisados, houve o aparecimento de bandas de aproximadamente 870 pb em todas as amostras transformadas, enquanto as amostras pertencentes às plantas não transformadas não apresentaram amplificação de DNA. O SDS-PAGE do extrato total das folhas coletadas não apresentou um padrão de bandas específico para as plantas transformadas. Enquanto o ensaio de imunodetecção (Western Blotting) das amostras apresentou o aparecimento de bandas específicas da ConBr apenas nas plantas transformadas com o gene conbrK pertencentes à geração T0. |
||
| CONCLUSÕES:
As transformações das plantas de fumo e a transferência dos genes à primeira geração foi confirmada. Porém, a expressão da lectina recombinante (rConBr) foi confirmada apenas em um dos tratamentos (conbrK) em plantas da geração T0. Essa dificuldade de detecção da expressão protéica pode estar relacionada a uma baixa expressão da lectina, deficiências no processamento ou degradação da proteína. |
||
| Instituição de fomento: CNPq, FUNCAP e BNB | ||
| Trabalho de Iniciação Científica | ||
| Palavras-chave: ConBr; recombinante; fumo. | ||
| Anais da 57ª Reunião Anual da SBPC - Fortaleza, CE - Julho/2005 |