| D. Ciências da Saúde - 2. Medicina - 8. Medicina |
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O VALOR DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE NO DIAGNÓSTICO DA LEUCOENCEFALOPATIA MULTIFOCAL PROGRESSIVA |
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| Mario Correa Netto Pacheco Junior 1 |
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| (1. Fundação Oswaldo Cruz / FIOCRUZ) |
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| INTRODUÇÃO: |
A leucoencefalopatia multifocal progressiva (LMP) permanece sendo a segunda mais freqüente complicação do sistema nervoso central (SNC) em pacientes com AIDS na era HAART.Entretanto é pouco observada em nosso país, talvez pela dificuldade de acesso a métodos complementares. O diagnóstico de presunção de LMP pode ser feito por ressonância nuclear magnética (RNM) e para estabelecer-se o diagnóstico definitivo é necessária a biópsia cerebral, com uma precisão de 67 a 96% e sensibilidade de 80 a 90%. A reação em cadeia da polimerase (PCR) é um método não invasivo que pode propiciar um diagnóstico rápido e seguro quando combinado com os achados clínicos e de neuroimagem. Os objetivos são: implementar e determinar o valor de um nested PCR (nPCR) para detecção do DNA do vírus JC (JCV) no líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com suspeita de LMP. |
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| METODOLOGIA: |
Trata-se de um estudo prospectivo caso-controle, cuja população para análise é composta de casos suspeitos de LMP e os controles consistem de pacientes sem evidência de LMP, mas com outras condições neurológicas, com exceção de tumores cerebrais. Os critérios para elegibilidade de casos de LMP são clínicos e por neuroimagem. As amostras de LCR encaminhadas ao Serviço de Virologia são armazenadas em ambiente livre de produtos de PCR, para posterior extração do DNA genômico. Foram desenhados oligonucleotídeos externos e internos específicos para amplificar um fragmento de 389pb do antígeno T do JCV. Diluições seriadas do plasmídeo pM1TC (vetor pBR322 e inserto, genoma do JCV protótipo Mad-1) foram utilizadas para otimização do nPCR e determinação do limite de detecção do ensaio. Em todos os experimentos foram incluídos controles positivos, controle negativo e controle tampão. |
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| RESULTADOS: |
Os parâmetros críticos para aumentar a sensibilidade e especificidade do método, tais como: concentração de MgCl2, iniciadores e da enzima Taq polimerase da reação de PCR, a temperatura de anelamento e o número de ciclos do programa de ciclagem, foram estabelecidos, sendo possível detectar até 4 cópias do plasmídeo em 10μL de H2O. Até o presente, um total de 42 amostras clínicas de LCR foram testadas e o DNA do JCV foi detectado em 12/17 casos suspeitos e 0/25 controles (sensibilidade = 70%, especificidade = 100%). |
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| CONCLUSÕES: |
Apesar do limitado número de amostras clínicas testadas, conclui-se trata de um método com alto significado específico, pois o DNA do JCV não foi detectado em nenhuma amostra controle, sendo demonstrado somente nos casos suspeitos de LMP, sugerindo uma replicação ativa do vírus no parênquima cerebral. |
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Instituição de fomento: Cnpq/FIOCRUZ-PIBIC
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Trabalho de Iniciação Científica
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Palavras-chave: Poliomavírus JC; Leucoencefalopatia Multifocal Progressiva (LMP); Nested PCR (nPCR). |
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| Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |