O neurotransmissor acetilcolina (ACh) possui um papel importante no sistema nervoso participando de processos envolvendo comportamento, aprendizado e memória (Purves et al., 2005). A enzima acetilcolinesterase (AChE, E.C. 3.1.1.7) encontra-se presente em neurônios colinérgicos e catalisa a reação de hidrólise da ACh, possuindo um papel essencial na regulação dos eventos fisiológicos promovidos por este neurotransmissor (Das et al., 2001). A AChE é atualmente um importante alvo terapêutico em muitas doenças neurodegenerativas, além disso a interação desta enzima com compostos como por exemplo, os organofosforados também têm merecido atenção especial (Mortensen & Padilla, 1998; Silman & Sussman, 2005). Os organofosforados podem ser letais para os humanos porque inibem esta enzima levando ao acúmulo da ACh nas sinapses colinérgicas causando, entre outros efeitos, paralisia neuromuscular (Purves et al., 2005). Desta forma, devido a importância que a AChE possui na neurotransmissão colinérgica o estudo de novos compostos que possam interagir com a atividade desta enzima torna-se relevante na busca de terapias para situações patológicas que envolvam o sistema colinérgico. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar in vitro o efeito do 1,3-Difenil-5-Etoxi-Pirazol sobre a atividade da AChE de estriado, hipocampo e córtex cerebral de ratos adultos.

O composto 1,3-Difenil-5-Etoxi-Pirazol foi sintetizado no laboratório de Pesquisa e Síntese Orgânica da Universidade Federal de Santa Maria. Para avaliar a atividade da enzima AChE foram utilizados ratos machos Wistar adultos (n=5) os quais foram submetidos à eutanásia e as estruturas cerebrais (córtex, estriado e hipocampo) foram removidas e homogeneizadas em tampão Tris-HCl 10 mM. O homogeneizado foi submetido à centrifugação a 1000g por 10 min, e o sobrenadante obtido foi utilizado no ensaio enzimático. A atividade da AChE foi determinada de acordo com o método de Elmann et al. (1961).O meio de reação foi composto de 100mM de tampão fosfato pH (7.5) e 10 mM de DTNB. A enzima foi pré - incubada por 2 minutos com diferentes concentrações de 1,3-difenil-5-etoxi-pirazol dissolvido em álcool metílico (0.mM; 0.015 mM; 0.031 mM; 0.0625 mM; 0.125 mM e 0.250 mM). A reação foi iniciada pela adição de 0.8 mM do substrato acetiltiocolina e monitorada por 2 min a 412 h m em espectrofotômetro. A atividade da AChE foi expressa em µmol de acetiltiocolina hidrolisada/hora/mg de proteína. Os dados foram analisados por Anova de uma via seguido do teste de Duncan. As diferenças entre os grupos foi considerada significativa quando p<0.05. Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão

Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que no estriado o 1,3-difenil-5-etoxi-pirazol aumentou significantemente a atividade da AChE nas três maiores concentrações: 0,0625mM (22,7± 1,6,n=5,SEM; p<0,05); 0,125mM (24,9± 2,7,n=5,SEM; p<0,05); 0,250mM (44,1± 4,9,n=5,SEM; p<0,05) em relação ao grupo controle (17,33± 1,1). No hipocampo ocorreu um aumento na atividade da enzima nas concentrações de 0,031mM (4,1± 0,1,n=5,SEM; p<0,05); 0,0625mM (5,4± 0,37,n=5,SEM; p<0,05); 0,125mM (8,2± 0,4,n=5,SEM; p<0,05); e 0,250mM (15,5± 1,16,n=5,SEM; p<0,05) em relação ao controle (3,6± 0,16). No córtex ocorreu também um aumento na atividade da AChE nas seguintes concentrações: 0,031mM (3,5± 0,1,n=5,SEM; p<0,05); 0,0625mM (4,7± 0,18,n=5,SEM; p<0,05); 0,125mM (7,0± 0,31,n=5,SEM; p<0,05); 0,250mM (8,4± 1,1,n=5,SEM; p<0,05) quando comparado com o grupo controle (3,29± 0,18).

O composto 1,3-Difenil-5-Etoxi-Pirazol altera in vitro a atividade da AChE em hipocampo, estriado, e córtex cerebral nas maiores concentrações testadas. Acredita-se que o grupo fenila na posição N-1 do anel pirazólico seja importante para uma efetiva interação com a enzima comparando-se com resultados obtidos em nosso laboratório com outros 1H-pirazóis. Compostos que possam interagir com a enzima e provocar um aumento na sua atividade como o caso do 1,3-Difenil-5-Etoxi-Pirazol podem ser importantes no caso de intoxicações por organofosforados, visto que muitos dos sintomas provenientes da intoxicação por estas drogas são devido a inibição da atividade da AChE. Sendo assim não pode ser excluída a hipótese que o composto avaliado neste estudo futuramente possa ser utilizado no tratamento de algumas desordens do sistema colinérgico.