-Preparação dos extratos: Amostras de própolis in-natura foram extraídas em solvente à temperatura ambiente com agitação magnética por 24h. Os solventes utilizados foram:

1-Etanol 95%

2-Solvente C (contendo óleo de canola, solventes A e B e agente solubilizante)

3-Óleo de Canola e agente solubilizante

Após o período de agitação as amostras foram centrifugadas e os sobrenadantes armazenados em geladeira.

-Análise por espectrometria de absorção no UV-VIS:

As soluções obtidas foram analisadas por espectrometria de absorção utilizando o Espectrofotômetro por reflectância da Ocean Optics modelo USB 2000 com lâmpada de tungstênio-halogênio operando na região de 350 a 1050nm.

-Análise por espectrometria de massas: utilizou-se um espectrômetro de massas Q-Trap da Applied Biosstems. As amostras foram analisadas por inserção direta no espectrômetro de massas com ionização por eletrospray em modo negativo. As amostras para a análise foram:

Amostra 1: óleo de canola puro (referência)

Amostra 2: Extrato oleoso de própolis obtido com óleo de canola

Amostra 3: Extrato etanólico de própolis obtido com etanol 95%

O extrato etanólico (amostra 3) foi seco utilizando-se de um roto-evaporador. Alguns microgramas do extrato foram dissolvidos em metanol/água (1:1 v/v). Com o óleo de canola usado como referência e o extrato oleoso de própolis (amostras 1 e 2) foram feitas partições com metanol/água (1:1 v/v). Às três amostras adicionou-se 0,1% de solução concentrada de hidróxido de amônia.

Espectrometria no Visível: Para se comparar os espectros obtidos dos extratos foi tomado como referência o espectro do extrato etanólico. Os espectros dos extratos obtidos com o solvente C e com óleo de canola apresentam um pico em comum em aproximadamente 670nm, devido à presença de cromóforos ainda não identificados neste trabalho.

Contudo, esta banda é mais intensa para o extrato obtido com o solvente C mostrando que a presença dos solventes A e B e do agente solubilizante aumenta a eficiência da extração.

Espectrometria de massas: Ao comparar os três espectros obtidos percebe-se que o óleo de canola puro (amostra 1) apresenta poucos sinais, correspondentes aos principais ácidos graxos presentes na sua composição (ácido oléico e linoléico).

O extrato etanólico (amostra 3) da própolis apresenta espectro típico da própolis verde do Paraná rico em derivados de ácidos fenólicos. O espectro de massas do extrato oleoso (amostra 2) da própolis apresenta o mesmo perfil observado para o espectro de massas do extrato etanólico.

A partir da análise dos espectros obtidos por Espectrometria no visível e tomando como base o pico em aproximadamente 670nm pode-se concluir que tanto o etanol quanto o solvente C são eficientes para extrair compostos da própolis. A extração com óleo de canola sem a presença de outros solventes mais polares é menos eficiente, pois a intensidade de absorção observada é menor, mas o máximo de absorção apresenta-se no mesmo comprimento de onda.

Já a análise por Espectrometria de massas nos confirma que o óleo de canola extrai os mesmos compostos que o etano 95% uma vez que ao comparar os espectros obtidos para o extrato oleoso e etanólico verificam-se muitos sinais comuns a ambos os espectros.

Portanto, pode-se concluir que o extrato oleoso da própolis apresenta qualitativamente os mesmos componentes que o extrato etanólico. A identificação e quantificação dos flavonóides e/ou ácidos fenólicos presentes nos extratos de própolis será realizada futuramente por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência ou por técnicas mais acessíveis como a determinação de flavonóides totais por espectrometria no ultravioleta através da complexação com cloreto de alumínio.