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E. Ciências Agrárias - 4. Recursos Pesqueiros e Engenharia de Pesca - 3. Recursos Pesqueiros de Águas Interiores

EFEITO DO TIPO DE TECIDO NA QUANTIDADE E QUALIDADE DE DNA EXTRAÍDO DE Rhamdia quelen
Juliana Steinbach 1
Rodolfo Petersen  2
Carlos Henrique Orssatto  3
Juan Ramon Esquivel Garcia  3
(1. Bolsista, aluna de Graduação Engenharia Ambiental da /UNISUL; 2. Dr. Pesquisador Projeto Monitoramento da Ictiofauna /UNISUL; 3. Prof. Dr. Curso de Engenharia Ambiental /UNISUL)
INTRODUÇÃO:
O jundiá é uma espécie neotropical da Ordem Siluriformes de ampla distribuição no continente americano desde a Argentina até o México, sendo encontrado em quase todas as bacias hidrográficas. Por apresentar carne saborosa e de poucos espinhos é uma espécie de peixe apreciada tanto para pesca esportiva como para aqüicultura. O jundiá é muito procurado para cultivo por produtores rurais devido a sua excelente taxa de crescimento, hábito alimentar onívoro e altas taxas de fertilização e eclosão. Em adição a isso, este peixe tem sido objeto de estudo de diferentes pesquisadores em aspectos como a fisiologia reprodutiva, engorda, larvicultura, resposta ao estresse e transporte. Sabe-se através de observações empíricas de pescadores que existem vários fenótipos de jundiá diferenciados pela aparência, tamanho e coloração. O estudo da estrutura genética de diferentes populações dentro de uma mesma bacia e entre bacias, assim como em condições de cativeiro, é muito relevante para programas de conservação e melhoramento genético. O objetivo de presente trabalho foi avaliar o efeito do tipo de tecido (músculo e nadadeira) na quantidade e qualidade do DNA extraído. A definição de uma metodologia adequada de extração de DNA subsidiará informação para projetos de estimativa da variabilidade genética através de técnicas de biologia molecular como RAPDS e Microssátelites.
METODOLOGIA:
Os exemplares de Rhamdia quelen utilizados para a extração foram capturados na Piscicultura Panamá /UNISUL, estação localizada em Paulo Lopes (SC). Tecidos muscular e de nadadeira de 10 indivíduos foram fixados em 2 mL de etanol 70 %, acondicionados em tubos plásticos e transportados para o Laboratório de Engenharia Ambiental da UNISUL. A extração de DNA foi realizada através de processo de extração salina com utilização de solução de digestão composta por ácido clorídrico, EDTA e Tris-ácido clorídrico. Após completar o processo de extração, o DNA foi re-suspendido em água milique autoclavada. A visualização da qualidade do DNA foi realizada através de um aparelho transiluminador. Para tanto, foi necessário aplicar uma pequena alíquota de DNA em gel de agarose (0,8%), contendo brometo de etídio (10 mg/mL). O DNA foi dosado em espectrofotômetro Biophotometerâ (Eppendorf, Hamburg) e a pureza das amostras determinada pela relação da absorbância a 260/280 nm. Diferenças nas concentrações de DNA obtidas foram testadas estatisticamente através do “teste t” com auxílio do programa GENES.
RESULTADOS:

Dos dez indivíduos extraídos de ambos tecidos, 9 apresentaram condições propícias para futuras amplificações em estudos de variabilidade genética. A média da concentração extraída de DNA do tecido muscular foi de 460 ng/mL (desvio padrão = 384,82) e 397 ng/mL (desvio padrão = 374,94) na nadadeira. A relação DNA/RNA foi de 1,96 para ambos os tratamentos. Não foram observadas diferenças significativas nas médias da concentração de DNA extraído entre os tratamentos testados mediante a utilização do “teste t” (p = 0.47).

CONCLUSÕES:

Os resultados do presente trabalho indicaram que é possível a extração de DNA de nadadeira sem a necessidade de sacrificar o animal. É importante destacar que foram obtidos altos coeficientes de variação nos tratamentos estudados, sendo que os valores mínimos foram superiores á concentração mínima necessária para estudos de variabilidade genética. O protocolo de extração através da utilização de uma solução salina apresentou resultados satisfatórios em ambos tecidos possibilitando a substituição do típico protocolo de extração com fenol-clorofórmio, que é uma substância tóxica. Estas informações são importantes para futuros trabalhos de estimativa de variabilidade genética de populações de Rhamdia quelen inseridas em programas de monitoramento da ictiofauna e melhoramento genético.
Instituição de fomento: Universidade do Sul de Santa Catarina/UNISUL
Trabalho de Iniciação Científica  
Palavras-chave: DNA; Ecologia; Aqüicultura.
Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006