A ação direta ou a resultante das interações dos resíduos das atividades antrópicas com os componentes bióticos e abióticos do ecossistema podem produzir efeitos tóxicos e/ou genotóxicos nestes ambientes. Para estudo dos efeitos desses agentes sobre o material genético, vários protocolos incluem ensaios “in vitro” utilizando culturas celulares como a linhagem V79, estabelecida a partir de células de pulmão de hamster chinês, que vem sendo amplamente utilizada na avaliação do potencial indutor de danos ao material genético causados por substâncias químicas puras ou amostras ambientais. O ensaio cometa é uma técnica simples, rápida e sensível para analisar e quantificar lesões no DNA como quebras simples ou duplas e danos álcali-lábeis e vem se mostrando efetivamente vantajoso em estudos de mutagênese e carcinogênese provocadas por poluentes. Este trabalho apresenta a primeira etapa de ensaios realizados visando adaptar a metodologia do Ensaio Cometa em V79 para avaliar a genotoxicidade de águas de rio “in natura”, em testes com exposição direta, buscando a construção de uma curva de respostas a várias proporções de amostras dessas águas, para avaliar seu efeito nos resultados genotóxicos, possibilitando a escolha da dosagem a ser usada no monitoramento de cursos de água. O Rio dos Sinos foi escolhido para testar essa metodologia por receber a influência de diversas contribuições antrópicas como atividades agrícola, industrial, doméstica e hospitalar.

Na bacia do Rio dos Sinos foram escolhidos cinco locais, denominados de acordo com sua distância em Km da foz do rio: SI008, SI028 e SI048 - áreas com maior influência antrópica e SI121RO040 e SI188 – localizados a montante, escolhidos como locais de referência. As coletas ocorreram nos meses de Junho/05, Agosto/05 e Outubro/05 e as amostras de água foram esterilizadas por filtragem (poro de 0,2 micra). A exposição de V79 à água bruta foi testada iniciando-se com uma proporção de 50% da amostra no volume total de suspensão celular. Alíquotas extraídas de um cultivo contendo 1x10⁶ células em 400μl de meio foram inoculadas em microtubos e expostas a 200μl da amostra de água bruta de cada local de estudo, paralelamente ao controle negativo (água destilada estéril-200μl) e positivo (bleomicina 2 μg/ml). Foram incubadas em estufa com temperatura controlada de 37^o C por 3 horas, protegidas da luz. Após o período de exposição foram confeccionadas lâminas com 10ml de suspensão celular e 90 μl de agarose e colocadas em cubetas com solução de  lise (1:30h). A eletroforese foi conduzida em pH >13, 25V e 300mA, durante 20 minutos. Foram analisadas visualmente 100 células por amostra e classificadas de acordo com a extensão de dano ao DNA para porcentagens (%D) e índices de dano (ID, 0 - 400). Para a obtenção dos resultados estatísticos foi empregado o teste t de Student.

A proporção de amostra utilizada no ensaio permitiu a execução adequada do teste e a detecção de respostas genotóxicas. As amostras dos três locais que recebem maior influência antrópica SI008, SI028 e SI048 induziram respostas positivas para genotoxicidade nesse ensaio, quando comparados aos locais de referência. O potencial indutor de dano de cada amostra pode ser avaliado pelo significado estatístico alcançado nessas comparações. As amostras de SI008 e SI028 provocaram maiores índices de danos (ID) nos meses de junho e outubro respectivamente. As maiores porcentagens de dano (%D) foram verificadas nas amostras de SI028 em junho, SI048 em agosto e SI008 e SI028 em outubro. As médias de %D induzidas pelas amostras de SI008 e SI048 comparados estatisticamente ao local SI188 obtiveram significância ao nível de P<0,01% e SI028 de P<0,05%. Quando comparados ao local SI121RO040 as respostas das amostras de SI008, SI028 e SI048 foram significantes ao nível de P<0,05%. Quanto ao ID alcançaram resultados positivos as de SI008 e SI028 (P<0,05%) e SI048 (P<0,01%) comparados às amostras de SI188. Em relação ao SI121RO040 induziram respostas positivas às amostras de SI008 e SI048 (P<0,05%).

O presente estudo possibilitou a adaptação de um ensaio, de uso corrente na comunidade científica em estudos de substâncias puras, para utilização em amostras do ambiente aquático. Os dados levantados nesse trabalho sugerem que a inclusão do Ensaio Cometa nas baterias de ensaios utilizadas para avaliação da genotoxicidade ambiental é uma ferramenta promissora para o monitoramento da qualidade de recursos hídricos sob ação antrópica. A proporção de amostra utilizada nos testes permitiu a detecção de resultados genotóxicos em V79. Diferentes proporções de amostras devem ser testadas visando à construção de uma curva de respostas para avaliar seu efeito nos resultados genotóxicos obtidos e a escolha da melhor proporção a ser usada nos ensaios de monitoramento. Nesta etapa do estudo as respostas genotóxicas obtidas foram concordantes com a pior qualidade físico química dos locais onde ocorreram.