IMPRIMIR VOLTAR
D. Ciências da Saúde - 5. Farmácia - 5. Farmacognosia
AVALIAÇÃO QUÍMICA E PURIFICAÇÃO DE UMA FRAÇÃO (AG-4) OBTIDA POR CROMATOGRAFIA EM COLUNA DA SOLUÇÃO EXTRATIVA HIDROETANÓLICA DE Agaricus blazei MURILL
Gustavo de Almeida Chagas Fernandes 1
Marcos Rodrigues 1
Mayara Medeiros Doile 1
Luciano Soares 2
(1. Acadêmico, Departamento Fármacia, Universidade da Região de Joinville/UNIVILLE; 2. Orientador, Departamento Fármacia, Universidade da Região de Joinville/UNIVILLE)
INTRODUÇÃO:

O Agaricus blazei Murill pertence à família Agaricaceae e é conhecido popularmente como Cogumelo de Deus e Cogumelo do Sol. Em vários países (em destaque o Japão) é usado no tratamento de tumores, diabetes, doenças hepáticas crônicas e outras doenças. Estudos farmacológicos pré-clínicos já demonstraram atividades hipoglicemiante, vasorelaxante, antitumoral, antimutagênica, antiinflamatória e imunomodulatória de suas preparações, bem como de substâncias isoladas do mesmo. O amplo espectro de ação demonstrado pelo A. blazei o caracterizam com um insumo natural de grande potencial para o desenvolvimento de um medicamento. Entretanto, a necessidade de garantir a qualidade nos produtos farmacêuticos, ressalta a importância do isolamento de um composto, preferencialmente, bioativo, em elevada concentração e de fácil detecção, para ser utilizado como marcador químico da matéria-prima e do produto final. O objetivo do trabalho foi avaliar preliminarmente o perfil químico e purificar uma fração (AG-4) obtida por coluna cromatográfica de solução extrativa hidroetanólica 70% de A. blazei, e suas subfrações.
METODOLOGIA:

A AG-4 é uma fração obtida por cromatografia em coluna de uma solução extrativa hidroetanólica 70% (SE) de A. blazei. Esta fração foi caracterizada por cromatografia em camada delgada (CCD), utilizando-se cromatofolha em base de alumínio, gel de sílica como adsorvente e percurso de 8 cm. Empregou-se solventes grau “P.A.” na preparação dos eluentes. A placa foi revelada sob luz visível e ultravioleta, nos comprimentos de onda de 254 e 360 nm, e também, com o reativo anisaldeído sulfúrico 0,5% (AS). Registraram-se as manchas presentes, verificando-se a coloração destas sob luz visível, 254 e 360 nm, antes e após a revelação química. Os Rfs das substâncias foram calculados.

Após a caracterização por CCD, a AG-4 foi purificada por cromatografia em coluna, utilizando-se 82,2 g de gel de sílica por coluna, com dimensão de 52,5 x 2,5 cm, e eluente previamente selecionado por CCD. As subfrações foram monitoradas por CCD, tendo os seus rendimentos calculados em relação à quantidade de amostra aplicada na coluna.

Todas as subfrações foram submetidas à precipitação por acetona ou etanol. Foram adicionados 5-15 mL de acetona ou etanol às subfrações secas, observando-se a formação de precipitado. Na ocorrência deste, a mistura foi submetida à centrifugação (7000 rpm; 2 minutos) para separação de sobrenadante e precipitado, o qual teve o rendimento calculado em relação à massa total da respectiva fração. As subfrações originais e seus precipitados foram caracterizados por CCD.
RESULTADOS:

A fração AG-4 (826,2 mg) originou-se de frações com maior tempo de retenção na cromatografia em coluna da SE de A. blazei. Esta fração, caracterizada por CCD (etanol (EtOH): H20 9:1) apresentou um perfil cromatográfico com quatro manchas: I-verde sob luz visível, Rf 0,34; II-visível a 254 nm, azul a 360 nm, roxa após AS, Rf 0,49; III-amarela a 360 nm, roxa após AS, Rf 0,60; IV-visível a 254 nm, azul a 360 nm, roxa após AS, Rf 0,71. Este eluente foi utilizado para a realização de cromatografias em coluna (massa total aplicada=826,2 mg, série eluotrópica=EtOH:H2O 9:1 e EtOH:H2O 1:1). Obteve-se 7 subfrações, denominadas de AG-4A à AG-4G de rendimento entre 2,9-13,1%. O rendimento total das subfrações (41,84%) evidenciou que a utilização de sílica gel como fase estacionária promove perda superior a 50% da AG-4. Com os resultados obtidos, a purificação das subfrações foi realizada por precipitação.

Destacaram-se as subfrações que apresentaram rendimento mais elevado (AG-4A, AG-4B e AG-4E). Primeiramente, a AG-4E, subfração de maior rendimento (13,1%), não formou precipitado pelo método empregado. Entretanto, na AG-4A e AG-4B, diluídas com etanol, observou-se a formação de precipitados em ambas. O precipitado da AG-4A (40,85%) apresentou três manchas. Entretanto, foi a subfração AG-4B (subfração com cinco manchas) que apresentou um precipitado de maior rendimento (87,7%) e perfil cromatográfico mais puro, com duas manchas: I-amarela a 360 nm, Rf 0,51; II-amarela a 360 nm, Rf 0,71.
CONCLUSÕES:

A purificação dos componentes da fração AG-4 não demonstrou ser eficiente por coluna cromatográfica. Esta ineficiência na separação ocorreu provavelmente devido aos componentes da fração AG-4 apresentarem caráter polar, semelhante ao caráter da fase estacionária (gel de sílica) utilizada na cromatografia em coluna. Desta forma, muitas substâncias ficaram retidas, o que inviabilizou a purificação por este método. Para a purificação destas substâncias por cromatografia em coluna, uma alternativa seria a utilização de outras fases estacionárias, preferencialmente fase reversa.

Para a continuidade da purificação das subfrações obtidas da AG-4, utilizou-se a precipitação com acetona e etanol. A fração AG-4B foi purificada por precipitação em etanol, sendo que esta fração apresentou um perfil cromatográfico com cinco manchas e seu precipitado apresentou apenas duas manchas. Além disso, o precipitado da fração AG-4B apresentou elevado rendimento (87,7%).

Portanto, a purificação pelo método de precipitação por acetona e etanol mostrou-se eficiente para purificar as subfrações obtidas da AG-4, obtendo-se frações mais purificadas e com rendimento elevado. Este fato torna relevante a utilização desta técnica para a purificação de frações equivalentes à estudada.

Instituição de fomento: Fundo de Amparo à Pesquisa/UNIVILLE
Trabalho de Iniciação Científica  
Palavras-chave: Agaricus blazei; investigação química; precipitação.
Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006