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C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

CISTEÍNO-ENDOPEPTIDASE DE LARVAS DE  Boophilus microplus: PURIFICAÇÃO E INVESTIGAÇÃO DO PAPEL FISIOLÓGICO.

Andréia Estrela 1
Adriana Seixas 1
Carlos Termignoni 1
(1. Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul / CBiot UFRGS)
INTRODUÇÃO:

O carrapato Boophilus microplus (Canestrini, 1887) é um ectoparasita hematófago cujo ciclo de vida apresenta uma fase de vida livre, que compreende o desenvolvimento dos ovos, eclosão, e desenvolvimento das larvas, e uma fase de vida parasitária em um único hospedeiro. Como muitos artrópodes ovíparos, para completar seu desenvolvimento embrionário, este parasita depende de substâncias de reserva presentes no vitelo, principalmente vitelina (Vt), que continua presente no estágio larval. Uma cisteíno-endopeptidase de larvas de B. microplus com atividade sobre vitelina foi parcialmente purificada e caracterizada (Estrela, A., SIC 2002).

METODOLOGIA:

No presente trabalho visamos estabelecer um protocolo de purificação mais eficiente para esta enzima, baseado em técnicas cromatográficas, e caracterizar a preparação obtida, através de ensaios enzimáticos com substratos fluorescentes. Também foram investigados aspectos bioquímicos do desenvolvimento de larvas não alimentadas, utilizando análises por SDS-PAGE e Western blot.

RESULTADOS:

O novo protocolo de purificação resultou em uma preparação contendo uma proteína majoritária de 45 kDa (rendimento de 48% e fator de purificação de 194). Sobre substratos sintéticos, a enzima purificada apresentou atividade ótima à temperatura de 42°C e pH 5,5 e é instável em pH acima de 7,5. A atividade proteolítica sobre vitelina foi confirmada. Experimentos com extratos de larvas de diferentes idades indicaram aumento da atividade proteolítica, acompanhado de uma diminuição no conteúdo de proteína total e de vitelina, conforme as larvas se desenvolvem.

CONCLUSÕES:

Estes resultados são compatíveis com a participação desta enzima na digestão de vitelina em larvas não alimentadas, suprindo suas necessidades nutricionais no período que antecede a alimentação hematófaga.

Instituição de fomento: CNPq- PBIC, CAPES
Trabalho de Iniciação Científica  
Palavras-chave: Boophilus microplus; vitelina; cisteíno-endopeptidase.
Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006