| C. Ciências Biológicas - 9. Imunologia - 2. Imunologia Celular |
|
PATOGÊNESE DA LESÃO TECIDUAL NA HANSENÍASE: PARTICIPAÇÃO DAS METALOPROTEINASES DE MATRIZ NA RESPOSTA IMUNE E INFLAMATÓRIA NA PELE DE PACIENTES |
|
| Ítalo Márcio Calmon Fayad dos Santos 1 |
| Rosane M. B. Teles 1 |
| Danielle F. Moura 1 |
| Elizabeth P. Sampaio 1 |
| Euzenir N. Sarno 1 |
|
| (1. IOC - Fiocruz-RJ - Laboratório de Hanseníase - Departamento de Micoacterioses) |
|
|
| INTRODUÇÃO: |
A regulação da expressão e função de metaloproteinases de matriz (MMPs) e de seus inibidores (TIMPs), é essencial para a manutenção da homeostase da matriz extracelular, degradação tecidual e a migração de células inflamatórias. MMPs são induzidas por diversos estímulos como citocinas e são secretadas por vários tipos celulares, como macrófagos. A participação das MMPs, como as gelatinases (MMP-2 e MMP-9), na indução da lesão tecidual vem sendo descrita em diversas doenças inflamatórias e infecciosas. Na hanseníase, a infecção pelo Mycobacterium leprae induz lesões de pele, mucosas e nervos periféricos. Esta doença possui um amplo espectro clínico, onde os pacientes possuem resposta imunológica diferenciada dependendo da sua forma clínica. Além disso, durante o curso crônico da doença esses pacientes podem desenvolver episódios reacionais caracterizados por inflamação aguda associada com mudanças na resposta imunológica. Logo a avaliação da expressão gênica de MMP-2, MMP-9, TIMP-1 e TNFα em biópsias de pele de pacientes com diferentes formas clinicas e durante os episódios reacionais, assim como, a análise da atividade das MMPs nestes pacientes é de grande importância para o entendimento da lesão tecidual na Hanseníase. |
|
| METODOLOGIA: |
Foram coletadas biopsias de pele de 10 pacientes (5 pauci e 5 multibacilares) do Ambulatório Souza Araújo da FIOCRUZ-RJ. Além disso, foram coletadas biópsias de pele de 3 pacientes multibacilares antes e durante os episódios reacionais. Depois de coletadas estas foram armazenadas em nitrogênio líquido até o posterior uso. Para o desenvolvimento deste trabalho utilizamos apenas a derme para a extração de RNA e de proteínas. Para a análise da expressão de RNAm de MMP-2, MMP-9, TIMP-1 foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os produtos amplificados foram submetidos à eletroforese em gel de agarose e analisados por densitometria para a conversão em valores gráficos. Para a análise de atividade de MMP-2 e MMP-9 um fragmento da derme foi separado e triturado em PBS, e seguida foi realizada a quantificação de proteínas e uma quantidade de 10mg de cada amostra foi submetido a um SDS-PAGE com gelatina como substrato para a realização da análise zimográfica. O gel foi corado com comassie blue para a visualização das bandas de digestão. |
|
| RESULTADOS: |
A expressão de RNAm de TNFa, MMP-2, MMP-9 teve um aumento significativo (p< 0,05) de cerca de 70% na derme de pacientes paucibacilares em comparação aos multibacilares, os níveis de RNAm de TIMP-1 também estavam aumentados em pacientes pauci em comparação a multibacilares cerca de 30%. A análise da atividade de MMP-2 e MMP-9 também foi avaliada e foi verificado um aumento destas proteases na derme de pacientes paucibacilares por zimografia em paralelo com a expressão gênica. Em seguida, foi realizada a análise da expressão de RNAm destas mesmas moléculas na derme de indivíduos multibacilares antes e durante os episódios reacionais. Foi verificado que os níveis de RNAm de MMP-2 e MMP-9 estavam elevados significativamente (p<0,05) durante o episódio reacional cerca de 80% e 60% respectivamente. Os níveis de TNFa também estavam aumentados durante a reação cerca de 50%. No caso dos níveis de RNAm de TIMP-1 não foi observado um aumento durante a reação. Quando foi realizada a análise zimografica da derme durante a reação foi verificada a presença de MMP-2 e MMP-9 ativas. |
|
| CONCLUSÕES: |
A expressão de MMPs e TIMP-1 pode estar relacionada com a presença de uma resposta imune celular Th1, já que a expressão destas moléculas estão aumentadas na derme de pacientes paucibacilares. Além disso, a expressão de RNAm e a atividade de MMP-2 e MMP-9 está aumentada na derme de pacientes durante o episódio reacional, o mesmo não foi observado para TIMP-1. Parece ocorrer um desequilíbrio entre a expressão de MMPs e de TIMP-1 o que pode estar relacionado com o processo inflamatório e na lesão tecidual durante o episódio reacional na Hanseníase. |
|
Instituição de fomento: CNPq
|
|
Trabalho de Iniciação Científica
|
|
Palavras-chave: Metaloproteinases; Lesão Tecidual; Hanseníase. |
|
| Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |