Sistemas aquosos bifásicos (SABs) têm sido usados na purificação de proteínas e ácidos nucléicos. São formados pela reunião de determinados polímeros, polieletrólitos, ou ainda polímeros em combinação com solutos de baixa massa molar. A utilização de polietilenoglicol (PEG) e sal vem sendo aplicada devido ao seu menor custo, baixa toxicidade, grande faixa de aplicação e curto tempo para separação das fases. A purificação em SABs é resultado da partição diferenciada da molécula-alvo e impurezas entre as duas fases líquidas. A amiloglicosidase é uma enzima extracelular de grande importância na indústria de alimentos e bebidas, atuando na hidrólise completa do amido em glicose. A redução do custo e de perdas da enzima no processo de purificação é de fundamental importância na viabilidade do processo. O objetivo desse trabalho foi estudar o efeito da massa molar do PEG na purificação de amiloglicosidase de Aspergillus niger NRRL 3122 através de sistema aquoso bifásico formado por PEG e fosfato de potássio, em pH 7,0, obtendo como resposta o rendimento e o fator de purificação.

A enzima foi obtida por fermentação em estado sólido utilizando a cepa de Aspergillus niger NRRL 3122. Dois sistemas foram preparados, um com PEG 6000 e outro com PEG 300 com as requeridas quantidades de fosfato de potássio e extrato enzimático, para obter as duas fases. A mistura foi mecanicamente agitada, as fases de topo e de fundo foram separadas, e seus volumes foram medidos. As alíquotas foram analisadas quanto à atividade enzimática e proteína total, sendo determinados a partir destes dados a recuperação e o fator de purificação para cada ensaio realizado.

Foi observado através das análises experimentais para o PEG 300 que a distribuição da enzima se deu preferencialmente na fase de topo diferentemente de quando se utilizou PEG 6000, quando a enzima se localizou na fase de fundo. Embora as recuperações obtidas tenham sido bastante elevadas na utilização do PEG 300, em torno de 80 a 90%, superando os valores obtidos com a utilização do PEG 6000, o mesmo não pode ser observado quanto ao fator de purificação, pois não houve incremento na atividade específica da enzima. A utilização de baixas concentrações de sal, quando utilizado o polímero de peso molecular 6000 influenciou positivamente a recuperação e o fator de purificação da amiloglicosidase.

O polietilenoglicol mais adequado para purificação da enzima amiloglicosidase é o de massa molar 6000, sendo o sistema formado por 17,5% PEG e 10% Sal o que apresentou os melhores resultados, proporcionando um rendimento de 75,3% e fator de purificação de 1,7 vezes.