| D. Ciências da Saúde - 2. Medicina - 8. Medicina |
|
ESTUDO DAS MUTAÇÕES ΔF508, G542X, G551D, R553X, N1303K, R1162X E 2183AA→G EM PACIENTES COM FIBROSE CÍSTICA (FC) NO NORDESTE, ESTUDO MOLECULAR E ACOMPANHAMENTO GENÉTICO DE SEUS FAMILIARES |
|
| Ana Júlia Velozo Ribeiro 1 |
| Tatiane Bezerra Moura 1 |
| Maria Denise Fernandes Carvalho 2 |
| Rosa Germana da Silva Oliveira 1 |
| Krishnamurti de Morais Carvalho 1 |
|
| (1. Universidade Estadual do Ceará - UECE; 2. Universidade de São Paulo - USP) |
|
|
| INTRODUÇÃO: |
A Fibrose Cística (FC) é a afecção genética autossômica recessiva de maior incidência mundial. É uma exocrinopatia complexa, crônica, grave, envolvendo pulmões, pâncreas e glândulas sudoríparas. Essa doença é pouco conhecida no Brasil, até mesmo pelos profissionais da área de saúde. Alguns fatores contribuem para este desconhecimento: altas taxas de mortalidade infantil, cujas causas de morte “primária” seriam doenças pulmonares e gastrintestinais (sintomas mais freqüentes da FC), óbito de grande parte dos afetados sem diagnóstico, dificuldade de acesso a testes diagnósticos ou até mesmo variabilidade de expressão das formas clínicas. O presente trabalho tem como objetivo fazer uma triagem e determinar as freqüências das sete mutações mais encontradas no gene da FC, em pacientes com FC no Nordeste. Considerando-se que as freqüências das diversas mutações da FC são baseadas em estudos que abrangem apenas Estados do Sul e Sudeste do Brasil, decidimos estudar a freqüência dessas mesmas mutações no Nordeste, contribuindo para estatística e análise nacional das mesmas.Tratando-se de uma doença autossômica recessiva, o estudo molecular destas mutações contribui para o aconselhamento genético com análise molecular para os familiares dos pacientes com FC. A relação do fenótipo com o genótipo encontrado pela análise molecular poderá contribuir nacional e internacionalmente no tratamento desta doença, abrindo perspectivas futuras para terapia gênica. |
|
| METODOLOGIA: |
Selecionamos os pacientes com história sugestiva de FC, que apresentaram pelo menos dois dos quatro critérios clínicos básicos: doença pulmonar obstrutiva supurativa crônica, insuficiência pancreática, níveis elevados de cloro e sódio no suor e história familiar de FC. Eles foram submetidos à coleta de 10ml de sangue em tubo com EDTA 6%. Todos os pacientes responderam a um protocolo de averiguação de descendência étnica e assinaram termo de consentimento livre e esclarecido. Para a análise molecular foram utilizadas técnicas de extração de DNA manual, cujo protocolo foi descrito por JOHN e cols. (1990) e modificado por LAHIRI e NUNBERGER JR. (1991); reação em cadeia da polimerase (PCR); digestão enzimática; e eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida. Realizamos a leitura do DNA extraído utilizando espectrofotômetro em 260 e 280nm. Calculamos então, a concentração e a pureza do DNA extraído. Em seguida, realizamos a PCR, que consiste na amplificação enzimática de uma seqüência específica de DNA, visando a produção de milhões de cópias dessa seqüência em um tubo de ensaio. A etapa seguinte, digestão enzimática, foi realizada através de enzimas de restrição. Após a digestão enzimática as amostras das mutações foram submetidas a eletroforese em gel de poliacrillamida a 8%, havendo separação dos fragmentos específicos, podendo assim ser determinado o genótipo do paciente. Os dois tipos de géis citados foram corados com brometo de etídio, sendo visualizados na luz UV. |
|
| RESULTADOS: |
Foram analisados os genótipos de 41 pacientes, já diagnosticados clinicamente e submetidos ao tratamento de escolha. A mutação ΔF508 foi encontrada em 65,3% dos alelos. As freqüências das mutações G542X e N1303K foram 2,8% e 1,4%, respectivamente. Nenhum alelo foi encontrado com as mutações G551D, R553X, R1162X e 2183AA→G. Embora alguns desses resultados sejam similares àqueles da população mundial, eles são muito próximos aos da população portuguesa, cuja contribuição para a colonização prevaleceu no Nordeste do Brasil. Vale ressaltar que a incidência das mutações estudadas aqui é diferente daquela encontrada em pacientes do Sul e Sudeste do Brasil, onde predominaram diferentes ondas de imigração de outros países europeus. |
|
| CONCLUSÕES: |
O estudo realizou triagem e determinação da freqüência das mutações supracitadas, seu estudo molecular, a relação do fenótipo dos pacientes com o genótipo encontrado, além do aconselhamento genético para todos os pacientes triados e seus familiares. Os dados obtidos poderão ter conseqüências importantes para o desenvolvimento de estratégias adequadas para o diagnóstico molecular dessa doença genética no Nordeste do Brasil. |
|
Instituição de fomento: Funcap
|
|
Trabalho de Iniciação Científica
|
|
Palavras-chave: Fibrose Cística; Mutações; Aconselhamento Genético. |
|
| Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |
|