O clone de Leishmania major (MHOM/IL/80/Friedlin) e isolados de parasitos da região Centro-Oeste foram usados para os experimentos. A obtenção das formas promastigotas foi realizada da seguinte forma: Leishmania major (ou isolados do parasito) foi repicada em frascos de plástico de 75cm² (BECTON-DICKINSON) a cada dois dias a partir de 1 x 105 promastigotas/mL em “Grace’s Insect Medium” (SIGMA Chemical Co). Os parasitos em fase estacionária (infectantes) foram colhidos após cinco dias e inoculados nas patas traseiras de camundongos fêmeas BALB/c suscetíveis à infecção por L. major e C57BL/6 resistentes à infecção por L. major. Os camundongos utilizados estavam com 6 a 10 semanas de idade.

Para comparar a produção de IL-12 de diferentes isolados, camundongos BALB/c foram inoculados na pata com as diferentes formas promastigotas do parasito. As formas infectantes de L. major são capazes de estimular a produção de IL-12 (p40) em linfonodos de camundongos BALB/c 48 h após a infecção, assim como as formas infectantes do isolado Sol03. Todavia as formas infectantes de L.b 2903 induziram uma pequena produção desta citocina. As formas infectantes do isolado Jov03, não induziram uma produção significativa de IL-12. Realizaram-se experimentos variando a dose de inóculo dos parasitos e a concentração de células nas culturas para observar se era possível observar uma maior produção desta citocina. Foi utilizada L. major por ser a espécie de parasito que mais induziu IL-12. Os resultados apresentados na Figura 1 mostram que o inóculo de 1 x 106 induziu pouca produção de IL-12p40 pelas células dos linfonodos poplíteos (drenantes do sítio da infecção) quase como a observada nos sobrenadantes de células de linfonodos controles. As doses com inóculos maiores, 5 x 106 ou 1 x 107, induziram uma produção maior desta proteína. Optamos por continuar a utilizar a dose de 5 x 106 formas promastigotas de fase estacionária de cultura, uma vez que a dose de inóculo maior (1 x 107), não promoveu aumento na produção destas citocina por células de linfonodos poplíteos. Células mieloides portando o marcador CD31 são células presentes na medula em um estágio de maturação mais indiferenciado. Não foram detectadas células expressando CD31 nos linfonodos de animais controles ou infectados com L. major, por imunocitoquímica. Entretanto, 20% das células de medula óssea foram positivas para o marcador CD31, o que sugere que realmente a quantidade de células portando este marcador deva ser mínima ou ausente no linfonodo.

O trabalho demonstra que está sendo possível quantificar a IL-12p40 48 h após a infecção murina por diferentes espécies de leishmania, mas não por todas. Além disto, células muito imaturas como as portadoras do marcador CD31 não estão presentes nos linfonodos infectados. Sendo assim, estas células provavelmente não participam da produção desta citocina no período investigado.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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STOBIE, L.; GURUNATHAN, S.; PRUSSIN, C.; SACKS, D.L.; GLAICHENHAUS, N.; WU, C.Y.; SEDER, R.A. The role of antigen and IL-12 in sustaining Th1 memory cells in vivo: IL-12 is required to maintain memory/effector Th1 cells sufficient to mediate protection to an infectious parasite challenge. PNAS 97: 8427-32, 2000.