Nogueira-macadâmia é uma planta de espécie arbórea de clima subtropical perene, pertencente à família Proteaceae, nativa do continente australiano. Macadâmias crescem melhor em áreas úmidas, porém toleram condições adversas uma vez estabelecida. As árvores produzem relativamente poucas raízes laterais, necessitando, portanto, de proteção contra vento em áreas expostas. Em 1948, técnicos do Instituto Agronômico de Campinas, iniciaram experimentos para a adaptabilidade de seu cultivo comercial às condições climáticas do país. Cada vez mais valorizada no mercado internacional, os negócios em torno da produção e da comercialização da noz macadâmia movimentam milhões de dólares ao ano, sendo, atualmente, uma das culturas mais rentáveis existentes. Os trabalhos de melhoramento têm possibilitado a indicação de cultivares mais promissores para a implantação das culturas.Em plantas perenes o conhecimento molecular é extremamente importante como auxílio no reconhecimento de híbridos no estádio inicial de desenvolvimento ou características específicas desejadas que auxiliem a diminuir o tempo de melhoramento. Neste trabalho foram estudadas oito seleções de macadâmia, utilizando a metodologia Randomly Amplified DNA Fingerprinting (RAF). Esta metodologia foi feita com a separação das bandas através de gel de agarose Metaphor, ao invés de gel de poliacrilamida. Além de se tentar encontrar marcadores específicos para cada seleção foi estudada a diversidade genética entre as seleções.

Os materiais foram constituídos de folhas de oito seleções. As amostras foram limpas com álcool e algodão, pesadas e congeladas até a extração do DNA. Foram feitas duas metodologias de extração de DNA, uma com CTAB e outra sem CTAB, sendo que após as extrações as amostras foram corridas em gel de agarose para quantificação do DNA. A reação de RAF foi realizada em volume de 11 μL com tampão 1X, 20 μmol/L dNTPs, 5 μmol/L de um simples primer de dez pares de base dos kits OPA, OPB, OPC da OPERON Technologies Inc e DNA genômico (1 a 500 ng). As reações foram processadas no termociclador com programação de uma desnaturação a 94°C por 4 minutos, então 30 ciclos de 94°C por 30 segundos e 1 minuto a cada 57°C, 56°C, 55°C, 54°C, e 53°C e uma etapa de extensão final a 72°C por 5 minutos. Os fragmentos amplificados foram separados em gel de 4% de agarose Metaphor usando tampão TAE 1X e as bandas visualizadas pela fluorescência do brometo de etídeo, em luz ultravioleta do transluminador. Os fragmentos também foram separados em Gel de acrilamida para posterior comparação de resultados. As coincidências da presença ou ausência de banda foram utilizadas para avaliação da similaridade genética (GS) entre espécies e acessos. A associação entre as espécies e acessos foi realizada através dos dados de GS pela análise multivariada e construção do dendrograma baseado no método de agrupamento UPGMA utilizando o programa NTSYS-pc, versão 1.7

Os Primers analisados forneceram um total de 153 bandas. Pela metodologia com o gel METAPHOR o número médio de bandas foi 18, utilizando-se o gel de poliacrilamida e coloração prata, o número de bandas do aumentou de em até três vezes, comprovando a maior eficiência do gel de poliacrilamida. Com relação à caracterização das seleções estudadas, a CAMPINAS B foi identificada por fragmentos amplificados específicos encontrados a 188pb e 239pb com o Primer OPA04 e a 140pb, 142pb e 290pb com o primer OPA06. Já para a KAU HAES 344 foi encontrado um fragmento amplificado especifico a 340pb utilizando-se o primer OPA04. A FLOR ROSA apresentou um fragmento amplificado especifico a 316pb utilizando-se o primer OPA04, enquanto a AFRICA 695, e com o primer OPA04, a 110pb. As amostras CAMPINAS B e KAU HAES 344 apresentaram um fragmento amplificado específico a ambas a 70pb com o primer OPA06. As amostras HAES 920 e KEAUHOU HAES 246 apresentaram marcadores específicos a ambas a 235pb e 237pb com primer OPA04. Verificou-se pelo dendograma a maior similaridade entre as seleções MAUKA HAES 741 e KEAAU HAES 660 que foram a seguir ligadas ao cluster formado pela FLOR ROSA, KEAUHOU HAES 246 e HAES 920. Este agrupamento ficou ligado aos cultivares CAMPINAS B e KAU HAES 344 e a seguir a mais distante, a AFRICA 695. A África 697 foi provavelmente a geneticamente a mais distante devido a sua origem diferente das demais seleções estudadas.

1- Os marcadores RAF podem auxiliar em muito os melhoristas de macadâmia pela identificação dos cultivares 2- A caracterização dos cultivares permitiu identificar maior proximidade com os cultivares originários do Havaí em relação ao de ascendência africana. 3- A metodologia RAF com gel metaphor é prática para se identificar genótipos de macadamia 4- O gel de poliacrilamida aumentou o número de marcadores específicos em 3 vezes com relação ao gel de metaphor comprovando sua maior eficiência.

Instituição de fomento: CNPQ, FAPESP

Trabalho de Iniciação Científica