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QUIESCINA/SULFIDRIL OXIDASE (QSOX) : PRODUÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-QSOX E ATIVIDADE ENZIMÁTICA EM SOROS FETAL E DE RECÉM-NASCIDO BOVINO |
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Daniele Freitas Batista 1 |
Cecilia Ikegami 2 |
Silvio Zanata 2 |
Lia Nakao 1 |
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(1. Pontificia Universidade Católica do Paraná; 2. Universidade Federal do Paraná) |
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INTRODUÇÃO: |
QSOX são enzimas encontradas em todos organismos multicelulares, as quais catalisam a oxidação de ditiois para disulfetos, reduzindo oxigênio a peróxido de hidrogênio. A QSOX é composta de dois domínios, tiorredoxina (Trx) e ERV1. Já é bem estudada a participação de tiol oxidoredutase durante a implantação, embriogenese, desenvolvimento fetal e particularmente o gen tiorredoxina no desenvolvimento embrionário.
Produzir QSOX recombinante pura de camundongo em E. coli; obtenção de soro policlonal anti-QSOX de camundongo, estudos sobre a atividade enzimática da sulfidril oxidase em soros fetal e de recém-nascidos bovinos foram os objetivos deste trabalho. |
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METODOLOGIA: |
A QSOX de camundongo (pares de base +123 até +1655, NM 023268) foi clonada no vetor pET32, entre os sítios de restrição KpnI e HindIII, a partir de cDNA de cérebro de camundongo. A proteína recombinante (rQSOX), foi transformada e expressa em cepa BL21 e foi purificada por cromatografia de afinidade a metal imobilizado. A identidade da proteína recombinante foi confirmada por western blot usando um anticorpo comercial anti-His tag. A rQSOX foi utilizada como antígeno para provocar produção de anticorpos em coelho. Foi utilizado um modelo bovino para estudar outros tiol-oxidoredutase durante o desenvolvimento. Utilizou-se um método contínuo por fluorescência, para medir a atividade enzimática da sulfidril oxidase em soros bovinos. |
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RESULTADOS: |
A rQSOX foi expressa, purificada e usada para produzir anticorpos policlonais. Os anticorpos comerciais a - His tag e a - peptideo 14 reconheceram a rQSOX. Os anticorpos policlonais anti- QSOX de camundongo foram capazes de reconhecerem a QSOX presente em extratos de vesícula seminal de rato e de camundongo. A QSOX é ativa nos soros fetal e de recém-nascido 10 dias, enquanto que o soro recém-nascido 60 dias não tem atividade. |
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CONCLUSÕES: |
Os anticorpos policlonais produzidos contra rQSOX e a proteína recombinante podem ser utilizados como reagentes específicos em ensaios biológicos e bioquímicos. A QSOX esta presente e ativa em soro fetal bovino e diminui a sua expressão e atividade após o nascimento. Os dados sugerem um papel ativo da QSOX no feto. Possíveis substratos extracelulares da QSOX incluem proteína de matriz, as quais são importantes moduladoras da proliferação celular, migração, adesão e diferenciação. |
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Instituição de fomento: Pontificia Universidade Católica do Praná e CNPq
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Trabalho de Iniciação Científica
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Palavras-chave: QSOX; Produção de anticorpos ; Atividade enzimática. |
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Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |