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D. Ciências da Saúde - 5. Farmácia - 6. Farmácia
QUIESCINA/SULFIDRIL OXIDASE (QSOX) : PRODUÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-QSOX  E ATIVIDADE ENZIMÁTICA EM SOROS FETAL E DE RECÉM-NASCIDO BOVINO
Daniele Freitas Batista 1
Cecilia Ikegami 2
Silvio Zanata 2
Lia Nakao 1
(1. Pontificia Universidade Católica do Paraná; 2. Universidade Federal do Paraná)
INTRODUÇÃO:

QSOX são enzimas encontradas em todos organismos multicelulares, as quais catalisam a oxidação de ditiois para disulfetos, reduzindo oxigênio a peróxido de hidrogênio. A QSOX é composta de dois domínios, tiorredoxina (Trx) e ERV1. Já é bem estudada a participação de tiol oxidoredutase durante a implantação, embriogenese, desenvolvimento fetal e particularmente o gen tiorredoxina no desenvolvimento embrionário.

Produzir QSOX recombinante pura de camundongo em E. coli; obtenção de soro policlonal anti-QSOX de camundongo, estudos sobre a atividade enzimática da sulfidril oxidase em soros fetal e de recém-nascidos bovinos foram os objetivos deste trabalho.

METODOLOGIA:

A QSOX de camundongo (pares de base +123 até +1655, NM 023268) foi clonada no vetor pET32, entre os sítios de restrição KpnI e HindIII, a partir de cDNA de cérebro de camundongo. A proteína recombinante (rQSOX), foi  transformada e expressa em cepa BL21 e foi purificada por cromatografia de afinidade a metal imobilizado.    A identidade da proteína recombinante foi confirmada por western blot usando um anticorpo comercial anti-His tag. A rQSOX foi utilizada como antígeno para provocar produção de anticorpos em coelho. Foi utilizado um modelo bovino para estudar outros tiol-oxidoredutase durante o desenvolvimento. Utilizou-se um método contínuo por fluorescência, para medir a atividade enzimática da sulfidril oxidase em soros bovinos.

RESULTADOS:

A rQSOX foi expressa, purificada e usada para produzir anticorpos policlonais. Os anticorpos comerciais a - His tag  e a - peptideo 14 reconheceram a rQSOX. Os anticorpos policlonais anti- QSOX de camundongo  foram capazes de reconhecerem a QSOX presente em extratos de vesícula seminal de rato e de camundongo. A QSOX é ativa nos soros fetal e de recém-nascido 10 dias, enquanto que o soro recém-nascido 60 dias não tem atividade.

CONCLUSÕES:

Os anticorpos policlonais produzidos contra rQSOX e a proteína recombinante podem ser utilizados como reagentes específicos em ensaios biológicos e bioquímicos. A QSOX esta presente e ativa em soro fetal bovino e diminui a sua expressão e atividade após o nascimento. Os dados sugerem um papel ativo da QSOX no feto. Possíveis substratos extracelulares da QSOX incluem proteína de matriz, as quais são importantes moduladoras da proliferação celular, migração, adesão e diferenciação.

Instituição de fomento: Pontificia Universidade Católica do Praná e CNPq
Trabalho de Iniciação Científica  
Palavras-chave: QSOX; Produção de anticorpos ; Atividade enzimática.
Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006