O sistema nervoso apresenta-se como um sistema de comunicação constituído por tipos celulares heterogêneos, sendo responsável pelo processamento e armazenamento de informações, assim como pela elaboração e execução de respostas comportamentais. A etapa de proliferação é fundamental no estabelecimento desse tecido, ocorrendo em camadas especializadas denominadas camadas ou zonas germinativas. Uma propriedade comum dos precursores neurais – neuroblastos – localizados nessas camadas é a comunicação juncional mediada por gap junctions durante o desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Esse tipo de comunicação tem sido implicado na modulação da proliferação e da migração celular, tendo as conexinas por unidades constituintes das gap junctions. O objetivo do presente trabalho é determinar os níveis de expressão e a distribuição de Cx43, uma das proteínas da família multigênica das conexinas (Cxs), nas camadas germinativas do telencéfalo de Rattus norvergicus entre os períodos embrionários E14-E19, visando fornecer uma ferramenta no entendimento do processo de comunicação entre tipos celulares envolvidos no estabelecimento das camadas do telencéfalo.

Como material de estudo, foram utilizados sessenta cortes de telencéfalo de embriões de R. norvergicus nos estágios embrionários E14, E17 e E19. Após cesariana das fêmeas, previamente anestesiadas com éter, foram obtidas fatias de cérebro de embriões (n=2 para cada estágio) de 300µm de espessura em Tissue choper. Para a técnica de imunohistoquímica, os cortes foram fixados em vapor de formol, sendo, em seguida, lavados com 0,1M PBS. O bloqueio dos cortes foi feito com solução de 0,1M PBS; 10% NGS; 0,1% Triton – X e como anticorpo primário foi utilizado anticorpo monoclonal  anti - Cx43 (1:25) (Zymed). Para visualização de Cx43 na região telencefálica de R. norvergicus em microscópio de fluorescência (NIKON Eclipse TE300), os cortes foram incubados com anticorpo secundário de cabra contra camundongo conjugado com Cy3 (1:800) (Zymed) e a marcação nuclear foi feita com DAPI. Para a técnica de hibridização in situ, os cortes foram preparados em lâminas contendo  poli-L-lisina e foi empregada sonda não-radioativa anti-senso de Cx43 marcada com fluoresceína. A reação de hibridização foi revelada utilizando-se anticorpo anti-fluoresceína (1:2000) (Gibco) acoplado com fosfatase alcalina. Como substratos foram empregados NBT e BCIP com posterior visualização dos cortes e registro em fotografia em microscópio estereoscópico.

Nos ensaios de imunohistoquímica para detecção de Cx43 nos cortes de telencéfalo de R. norvergicus observamos que essa proteína está distribuída ao longo da camada germinativa, projetando-se para as camadas celulares na região dorsal do telencéfalo, correspondente ao córtex, no estágio E14. No estágio E17, observa-se Cx43 na camada germinativa, distribuição essa que se projeta para as camadas celulares do telencéfalo nas regiões dorsal e na porção ventral dessa estrutura, região correspondente à eminência ganglionar. Em E19, detectamos uma abrupta diminuição na distribuição de Cx43 no telencéfalo, estando essa proteína presente em menores níveis apenas nas camadas celulares.  Através da técnica de hibridização in situ podemos observar a distribuição do mRNA de Cx43 em E14 em toda a vesícula telencefálica, com um padrão de expressão bastante proeminente ao longo da camada germinativa. Nos cortes de telencéfalo de embriões no estágio E17 observa-se que o mRNA de Cx43 tem uma distribuição notadamente ao longo da camada germinativa e em E19 nota-se uma queda brusca nos níveis de mRNA de Cx43, assim como observado para os níveis de proteína nos ensaios de imunohistoquímica.

Durante o desenvolvimento do telencéfalo, a comunicação mediada por gap junctions é bastante dinâmica Tal dinamismo faz-se necessário pois as células têm que resolver problemas como a proliferação celular, o timing da migração e o correto posicionamento final das células neurais nas camadas celulares. Sendo o acoplamento celular entre as células neurais decorrente da expressão espacial e temporal de Cxs, é de se esperar que essas proteínas também exibam variações em seus níveis – temporal e espacialmente – quando do desenvolvimento das vesículas telencefálicas. A abordagem do presente trabalho permite a inferência de que o padrão de distribuição de Cx43 pode ser o responsável pela comunicação entre neurônios recém-gerados e células gliais, substrato através do qual se dá a migração neural, fornecendo informações quanto ao correto posicionamento de populações neurais distintas nas camadas celulares do telencéfalo, já que se observa a projeção da expressão de Cx43 da camada germinativa às camadas celulares do telencéfalo entre E14-E17. Em E19 observamos uma abrupta diminuição nos níveis de Cx43, possivelmente pela expressão incipiente de outros tipos de Cxs nesse estágio, por exemplo Cx26, estabelecendo o acoplamento celular entre populações celulares distintas, necessário para que diferentes populações de células neurais desempenhem, a despeito de uma origem embrionária comum, funções diversas no SNC.