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O vírus da imunodeficiência humana é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida. O envelope viral do vírus HIV é intensamente investigado por conter um complexo glicoprotéico que é responsável pela entrada do vírus na célula. Este complexo é constituído pelas glicoproteínas gp41 (transmembrânica) e gp120 (superfície externa), associadas por interações covalentes na forma de trimeros. O presente trabalho tem como objetivo estabelecer um protocolo para amplificação dos fragmentos gênicos correspondentes a gp120 e gp41 de uma amostra de cDNA viral, subtipo C. Após a amplificação e clonagem, os fragmentos gênicos serão seqüenciados e poderão ser usados para subclonagem em vetor de expressão de células de mamíferos.

Os fragmentos gênicos correspondentes às proteínas do envelope viral de HIV-1, gp120 e gp41, foram amplificados por Nested-PCR a partir de uma amostra de cDNA viral, subtipo C. Os fragmentos gênicos resultantes das amplificações foram utilizados para clonagem no vetor pGEM-T easy, que por sua vez foi utilizado para a transformação de linhagens bacterianas de Escherichia coli. Dos clones bacterianos transformantes foi extraído o DNA plasmidial, e a presença de insertos foi confirmada pelo perfil de restrição e por PCR.

Após um a série de PCRs de padronização, foi estabelecido um eficiente protocolo para a amplificação dos fragmentos gênicos referentes à gp120 (1,5kb) e gp41(1,3kb) a partir da amostra de cDNA 116/00, subtipo C. Estes produtos de amplificação, após serem clonados no pGEM-T easy foram utilizados na transformação por eletroporação de bactérias da  linhagem de E. coli XL1-Blue. A presença dos insertos nos DNAs plasmidiais dos clones transformantes foi evidencia pela digestão dos plamídeos com a endonuclease de restrição EcoR I e por PCR utilizando-se os oligonucleotídeos específicos para cada fragmento gênico

Os fragmentos gênicos referentes à gp120 e gp41 foram eficientemente amplificados e clonados. Após seu sequenciamento, estes fragmentos gênicos estarão prontos para serem usados na subclonagem em vetor de expressão de células de mamíferos.