| E. Ciências Agrárias - 1. Agronomia - 4. Fitotecnia |
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SEGREGAÇÃO DE MARCADORES MICROSSATÉLITES EM POPULAÇÕES INTRA E INTER-ESPECÍFICAS DE MACIERA |
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| Sarah Zanon Agapito 1 |
| Adriana Cibele de Mesquita Dantas 1 |
| Frederico Denardi 2 |
| Rubens Onofre Nodari 1 |
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| (1. Universidade Federal de Santa Catarina/UFSC; 2. Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina SA/Epagri) |
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| INTRODUÇÃO: |
A cultura da macieira tem grande importância social e econômica no sul do Brasil. Entretanto, em decorrência das condições edafo-climáticas, as atuais cultivares apresentam, em geral, problemas de adaptação e suscetibilidade a várias pragas e doenças, que limitam a expressão do potencial genético destas espécies. A maneira mais adequada de solucionar estes problemas é o desenvolvimento de novas variedades adaptadas às condições ambientais locais e competitivas em termos de qualidade de frutos. Como os métodos tradicionais de melhoramento, embora eficientes, são demorados e onerosos, os avanços da genética e biologia moleculares podem proporcionar o desenvolvimento de ferramentas que aumentam significativamente a eficácia na escolha de parentais e dos métodos de seleção. Os marcadores moleculares permitem não só a caracterização das combinações genéticas, mas também a realização da seleção assistida, quando os mesmos estão fortemente ligados a genes de grande importância agronômica e de difícil avaliação fenotípica. Este trabalho tem como objetivo avaliar o grau de polimorfismo e tipos de segregações mendelianas de populações segregantes de cruzamentos intra e interespecíficos de macieira e mapear regiões responsáveis por características agronômicas de interesse, buscando proporcionar a seleção indireta como suporte ao desenvolvimento de cultivares adaptados às condições edafo-climáticas da região produtora de Santa Catarina. |
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| METODOLOGIA: |
O DNA foi extraído de folhas jovens da progênie do cruzamento entre as espécies M.9 (Malus pumila) e Marubakaido (M. prunifolia) e do cruzamento entre as cultivares Melrose (Malus domestica) e Gala (Malus domestica), utilizando-se o método CTAB-Sarcosyl. Os iniciadores microssatélites (SSR) foram selecionados a partir de uma biblioteca genômica de Malus x domestica (cv. Royal Gala) e foram sintetizados. As reações de PCR foram realizadas com um volume total da reação de 15 µL, consistindo de 40 ng de DNA genômico; 10 mM Tris-HCl pH9.0; 0,2 mM de cada dNTP; 1,5 mM MgCl2; 50mM de KCl; 0,2 µM de cada iniciador (Foward e Reverse), DMSO a 50% e 1U de Taq polimerase. As condições para amplificações foram feitas nos seguintes ciclos: uma desnaturação inicial em 940C por 2 min, continuado por 4 ciclos de 940C por 30 s, 650C por 1 min, 720C por 1 min, no qual a temperatura de anelamento foi reduzida 10C por ciclo, e por mais 30 ciclos de 940C por 30 s, 600C por 1 min e 720C por 1 min. O passo final de extensão foi de cinco minutos a 72ºC. Os produtos amplificados de microssatélites foram avaliados em gel desnaturante de poliacrilamida a 4%, utilizando um marcador de fragmentos de DNA (Ladder) de tamanho conhecido de 10 pares de base. Foram testadas diferentes temperaturas de anelamento (45 a 60oC), avaliado grau de polimorfismo e tipo de segregação. A análise da proporção de segregação esperada dos marcadores foi testada utilizando-se teste qui-quadrado. |
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| RESULTADOS: |
Dos 33 loci avaliados para a população interespecífica, 13 apresentaram segregação 1:1:1:1, 19 segregaram 1:1 e apenas o iniciador CH04e05 apresentou segregação 1:2:1. Do total avaliado, apenas o iniciador CH01d08 segregou conforme o esperado (c2= 3,476 ao nível de 5% de significância). Para a população intraespecífica foram avaliados 18 loci e destes, 10 marcadores segregaram 1:1, 6 segregaram 1:1:1:1 e apenas 2 segregaram 1:2:1. Os testes de c2 revelaram que mais de 77% dos marcadores não se desviou da proporção mendeliana esperada. |
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| CONCLUSÕES: |
Vários trabalhos realizados a partir de cruzamentos interespecíficos citam alto grau de distorção de segregação. Durante o processo de divergência entre espécies, o acúmulo de mutações, inserções e deleções, ou mesmo de translocações nos cromossomos, prejudica a capacidade de permuta (crossing over) entre cromossomos homólogos na meiose, resultando em diferenciação cromossômica e, em última análise, na conversão de cromossomos homólogos em homeólogos. Mais além, a macieira possui características de polinização e fertilização de óvulos bastante específica. Interações estigma-estilete-pólen e interações tecido de transmissão-tubo polínico são barreiras que controlam a germinação do grão de pólen e o crescimento do tubo polínico até o óvulo. Não obstante, as macieiras também possuem processos de formação de embriões apomíticos podendo interferir nas proporções de segregações analisadas. A segregação dos mesmos marcadores nas diferentes populações não pôde ser comparada quanto ao padrão de segregação mendeliana uma vez que na população interespecífica a segregação mostrou-se distorcida. Mapas genéticos serão gerados a partir das marcas obtidas e espera-se encontrar marcas próximas a genes de interesse para possibilitar a realização de seleção indireta ainda na fase juvenil. Todos os locos que segregaram 1:1 ou 1:1:1:1 serão incluídos no mapa genético de ligação das populações oriundas destes cruzamentos. |
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Instituição de fomento: Projeto de Apoio ao Desenvolvimento de Tecnologia Agropecuária para o Brasil/PRODETAB
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Trabalho de Iniciação Científica
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Palavras-chave: Malus domestica; marcadores moleculares; distorção de segregação. |
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| Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |
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