A neurocisticercose (NC) é uma infecção no sistema nervoso central humano causada pela presença da forma larvária da Taenia solium. O diagnóstico baseia-se em critérios clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. As provas destinadas à detecção de anticorpos específicos são um complemento importante dos estudos de neuroimagem. A pesquisa de anticorpos pode ser realizada pelo teste imunodot, que utiliza membrana de nitrocelulose sensibilizada com pequenas quantidades de antígeno e apresenta como vantagem a leitura visual. A dificuldade na disponibilidade de suínos contaminados para a obtenção de antígeno de T. solium empregados na detecção dos anticorpos específicos para NC tem sido solucionada com o emprego de antígeno heterólogo obtido da forma larvária de Taenia crassiceps, cepa ORF. O presente trabalho objetiva padronizar a metodologia de imunodot com antígeno de líquido vesicular de T. cracisseps na pesquisa de anticorpos específicos contra a forma larvária de T. solium.

A membrana de nitrocelulose foi cortada em quadrados de um cm e sensibilizadas com antígeno de líquido vesicular de T. cracisseps por 30 minutos. Os sítios remanescentes foram bloqueados com leite desnatado em pó a 5% em solução de lavagem (0,05% Tween 20 em salina) durante 1 hora. O soro diluído a 1:100 em solução de lavagem foi adicionado e incubado durante 1 hora para a detecção dos anticorpos específicos. A presença dos anticorpos foi revelada pela adição do conjugado (anti-IgG humana marcada com peroxidase) a 1:500 em solução de lavagem em incubação de uma 1, seguido da degradação da enzima pela solução reveladora (3 mg 4-cloro-naftol, 1 mL metanol, 5 mL salina e 5 mL H₂O₂) em reação de 10 minutos. O procedimento foi realizado a temperatura ambiente e sob agitação constante. Após cada etapa do ensaio foram realizadas 3 lavagens de 5 minutos com solução de lavagem, sendo a última realizada com água destilada. A membrana foi seca a temperatura ambiente para a identificação da presença de reação de cor (reação positiva). Para a padronização do imunodot foram ensaiadas diferentes concentrações do antígeno (0,1; 1; 5; 10 e 20 mg/ml) e de conjugado (1:100; 1:500; 1:5000, 1:10000 e 1:20000) frente a amostras de soro de pacientes portadores de NC na diluição 1:100. Após a definição das concentrações ótimas de uso foram estudadas 20 amostras de soro de indivíduos portadores de NC e 20 amostras de soro de indivíduos sadios não portadores da doença.

A padronização definiu como concentração ótima de uso 5 mg para o antígeno e 1:500 para o conjugado, empregando a membrana de nitrocelulose (Amersham, Little Chalfont, Buckinghamshire, Inglaterra). A partir da metodologia padronizada foram executadas as amostras de soro de 20 indivíduos saudáveis e de 20 pacientes portadores de NC. Todas as amostras do grupo de indivíduos saudáveis foram negativas no teste, enquanto que do grupo de pacientes com NC 8 amostras foram reativas no imunodot. Os parâmetros de avaliação de desempenho diagnóstico do teste mostraram indicadores de especificidade de 100%, sensibilidade de 40% e eficiência de 70%.

O objetivo de padronização do imunodot proposto neste estudo foi realizado, embora os parâmetros de avaliação de desempenho diagnóstico do teste, especialmente a sensibilidade, tenham determinado que o mesmo não tem aplicação na rotina diagnóstica da NC. Uma alternativa para aumentar a sensibilidade e a eficiência do teste seria concentrar a amostra e/ou conjugado. Contudo, o aumento da sensibilidade implicaria diretamente na perda de especificidade devido às reações inespecíficas com outros anticorpos. Mesmo considerando esta possibilidade foram ensaiados soro na concentração de 1:50 e conjugado a 1:250, comprovando ganho discreto na sensibilidade, mas com comprometimento e perda acentuada da especificidade do teste.