Pytirogramma calomelanos é uma espécie de samambaia pertencente à família Polypodiaceae que apresenta uma vasta ocorrência no estado de Mato Grosso do Sul. Chalconas e dihidrochalconas são produtos majoritários em todas as espécies do gênero Pityrograma, enquanto flavonas e flavonols são encontrados como produtos minoritários (Wollenweber & Schneider 2000). O presente trabalho relata a purificação e identificação de uma substância detectada no extrato etanólico bruto de P. calomelanos, elucidada como 2’,6’-dihidróxi-4’,4-dimetóxi-dihidrochalcona, bem como seu potencial antioxidante mediante avaliação qualitativa da atividade frente ao radical livre 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH). A procura por antioxidantes de fontes naturais tem recebido muita atenção e vários esforços têm sido investidos para identificar compostos que possam agir como antioxidantes satisfatórios para substituir os sintéticos (Wong, Leong & Koh, 2006), assim P. calomelanos apresenta-se como uma possível fonte natural para obtenção de agentes antioxidantes.

O projeto foi desenvolvido no Laboratório de Pesticidas Naturais da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS). A espécie foi coletada na Fazenda Curupi no município de Ponta Porã-MS. 159 g das folhas de P. calomelanos foram trituradas e submetidas à extração exaustiva com etanol rendendo 8,30 g de extrato bruto. Alíquotas de 2 mL de uma solução a 5 mg/mL foram aplicadas em triplicata em placas de alumínio impregnadas com sílica gel 60 F254 (Merck)  e o radical livre DPPH (2 mg/mL em etanol) foi utilizado como reagente revelador da atividade antioxidante  (Poullain, Girard-Valenciennes, Smadja, 2004). A placa cromatográfica foi eluída com o seguinte sistema de solventes: acetato de etila/etanol/água 50/35/15 e examinada 30 minutos após a aplicação do revelador DPPH. O composto ativo apareceu como sinal amarelo-claro sobre o fundo púrpura. O grau de atividade foi determinado qualitativamente a partir da observação da intensidade dos sinais amarelos, na escala: (+) para fraco, (++) para moderado e (+++) para forte, comparada com solução etanólica do antioxidante padrão BHA (2-terbutil-4-metoxifenol) (Argolo, Sant’ana,Pletsch & Coelho, 2004; Poullain, Girard-Valenciennes, Smadja, 2004). Após verificação da atividade antioxidante, o extrato etanólico foi submetido à cromatografia em camada delgada preparativa, eluído com o mesmo sistema de solventes.    

A fração resultante da eluição cromatográfica em CCD, foi identificada mediante seu comportamento frente ao radical livre DPPH e revelação sob radiação UV (254 e 366 nm) possibilitando o isolamento da substância ativa (17 mg). O composto isolado foi submetido a técnicas espectroscópicas de RMN ¹H e ¹³C sendo os valores obtidos comparados com dados da literatura (Agrawal, 1989; Barrero, Herrador, Arteaga, Garcia & Moreno, 1989), resultando na identificação da 2’,6’-dihidróxi-4’,4-dimetóxi-dihidrochalcona. O ensaio qualitativo com o radical livre DPPH comparou a intensidade da atividade antioxidante entre o composto isolado, o extrato etanólico e uma substância padrão (BHA) revelando ser este composto um forte agente antioxidante (+++).

O ensaio com o radical livre DPPH é um  teste simples que forneceu  informações quanto à capacidade antioxidante e ao poder redutor da amostra sob análise, possibilitando a partir da observação qualitativa da atividade antioxidante com relação ao DPPH do extrato bruto de P. calomelanos e revelação sob radiação UV o isolamento da 2’,6’-dihidróxi-4’,4-dimetóxi-dihidrochalcona. O Pantanal, o Cerrado e outras formações vegetais existentes em Mato Grosso do Sul  apresentam um grande potencial de exploração para a obtenção de produtos vegetais úteis, neste contexto, torna-se o estado uma possível fonte para obtenção de antioxidantes a partir de vegetais que aqui se desenvolvem.