O fungo Pyricularia grisea é o agente etiológico da brusone, doença de maior importância econômica na cultura do arroz.  Esse fungo possui alta variabilidade genética e por essa razão são encontradas inúmeras raças fisiológicas desse patógeno em todo o Brasil. De maneira convencional, o estudo da diversidade de P. grisea é realizado através da avaliação da virulência de isolados, inoculados em vários genótipos de arroz, com diferentes genes de resistência à brusone. Atualmente, muitos trabalhos vêm sendo realizados através da análise de DNA, por meio de marcadores moleculares. Para tanto, o cultivo do fungo é feito através de vários repiques em diferentes meios de cultivo tais como AA, BDA, CF e BDE, levando em torno de 30 dias para que sejam possíveis as análises genéticas. Além de laboriosa, essa metodologia pode comprometer os resultados; conforme Bedendo et al (1979), apenas um repique é capaz de originar formas diferentes de virulência do fungo. Assim sendo, são requeridas novas metodologias, que tragam rapidez e segurança na informação gerada. Para tal, a cepa estudada deve ser livre de variação em laboratório, e o DNA deve ser extraído diretamente do isolado usado como inóculo no método convencional, para ser possível a comparação entre este método e a análise molecular. O objetivo deste trabalho é criar uma metodologia rápida e confiável na análise molecular de Pyricularia grisea, diminuindo os riscos de variação do patógeno e seu tempo de cultivo in vitro.

Foi possível extrair DNA de todos os isolados de P. grisea testados. Todos os métodos adotados foram eficientes, sendo a extração de DNA de micélio crescido sobre papel filtro o que forneceu maior quantidade de DNA. Os três tubos controle, contendo meio de cultura, papel filtro estéril e reagentes, envolvidos no processo de extração, não apresentaram vestígios de DNA; a ausência de DNA nos controles torna-se um resultado importante, comprovando que todo o DNA obtido provém unicamente do fungo. Os isolados utilizados neste trabalho apresentaram bom crescimento micelial em meio CF, o que torna possível a coleta do material para análise molecular com apenas 10 dias de cultivo, ao contrário dos 30 ou mais dias normalmente requeridos pelo método tradicional, que utiliza o meio líquido BDE para obtenção de massa micelial. Mesmo tendo gerado uma quantidade menor de material, quando comparado com o cultivo em meio líquido, o método proposto forneceu material suficiente para extração de DNA para posterior utilização em metodologias moleculares. Além disso, por reduzir o número de repiques, possivelmente a metodologia aqui proposta diminui a probabilidade de variação in vitro dos isolados, trazendo, portanto, maior credibilidade nos resultados gerados e facilitando os estudos de diversidade genética de P. grisea.

Através deste estudo, ficou demonstrada a possibilidade de extração de DNA diretamente de isolados de Pyricularia grisea crescidos em meio de centeio fino, sem a necessidade de repicagens para o meio líquido BDE, como tradicionalmente feito. Das duas metodologias de coleta testadas, o método do micélio crescido sobre papel filtro forneceu maior quantidade de DNA. Portanto, essa nova metodologia torna-se eficiente, por proporcionar rapidez na obtenção de DNA para análise genética de P. grisea, eliminando várias etapas da cultura do fungo.