A Oxitetraciclina (OTC) é um fungicida e bactericida utilizado no tratamento de tubérculos e sementes e na aplicação das partes aéreas de diversos frutos e hortaliças não folhosas. Em tomates, um vegetal muito sensível a bacterioses, a OTC é usada para prevenção e tratamento de enfermidades como a mancha e cancro bacteriano. Esse uso pode incorrer na presença de resíduos no alimento expondo os consumidores a essa substância. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é uma técnica de separação versátil muito utilizada na análise de alimentos e tem sido o principal método de detecção e quantificação empregado na determinação de tetraciclinas. O objetivo do trabalho foi o desenvolvimento, otimização e validação de um método analítico para a determinação desse antimicrobiano em tomates por CLAE com detecção por fluorescência.

O preparo da amostra foi feito a partir de extração líquido-líquido (ELL), onde foram avaliados diferentes solventes extratores, seguido de extração em fase sólida (SPE) utilizando cartuchos com fase octadecil tipo C18. Nessa etapa foram testadas diferentes marcas de cartuchos, bem como solventes e tampões nas etapas de condicionamento, passagem da amostra, lavagem e eluição, visando obter os melhores resultados de recuperação da oxitetraciclina da matriz. Utilizou-se cromatógrafo a líquido Shimadzu VP, equipado com detector de fluorescência RF-10Avp, programa de dados e integração Class VP e coluna cromatográfica end-capped tipo C18 BDS Hypersil com 150 x 4,6 mm (comprimento x diâmetro interno) e 5 mm de tamanho de partícula. Os parâmetros cromatográficos avaliados foram: temperatura do forno e composição, concentração e pH da fase móvel visando obter a melhor resolução dos analitos, assim como os comprimentos de onda de excitação e de emissão do detector. Tetraciclina (TC) foi utilizada como padrão interno.

O melhor solvente de extração na ELL foi hexano. Para purificação do extrato no cartucho SPE foi utilizada, para lavagem, solução tampão McIlvaine (pH 4,0) + metanol (85:15 v/v) e metanol para eluição. A melhor condição para a detecção por fluorescência foi nos comprimentos de onda l = 390 nm (excitação) e 512 nm (emissão), e de resolução foram: temperatura do forno 20^o C, fase móvel composta de solução tampão (acetato de sódio (0,075 M), cloreto de cálcio (0,035 M) e EDTA sal dissódico (0,025 M) ajustado para pH=7,3) e metanol (7:3 v/v), com vazão de 0,8 mL/min. Os limites de detecção e quantificação para a OTC foram de 10 mg/kg e 30 mg/kg, respectivamente. A precisão foi avaliada pelo coeficiente de variação que variou de 1,4 a 2,6 % no estudo intra-dias e 4,5 a 5,2 % no estudo inter-dias. A curva analítica foi construída com 6 níveis de fortificação em quintuplicata e foi linear na faixa de 100 a 350 mg/kg com linearidade de 0,9991. O tempo de retenção dos analitos ficou em torno de 7 e 11 minutos para a OTC e TC, respectivamente. Foram também avaliados a seletividade, estabilidade e exatidão do método. Testes foram realizados para avaliar a conformidade do sistema cromatográfico, verificando a largura, número de pratos, simetria, resolução e espectro dos picos.

O uso da ELL juntamente com a SPE permitiu a obtenção de uma boa recuperação do analito. A detecção por fluorescência apresentou sensibilidade que permitiu detectar níveis abaixo do limite máximo de resíduo (LMR) permitido para OTC em tomates que é de 250 mg/kg, bem como limites de quantificação e precisão satisfatórios. A metodologia se mostrou apropriada para a determinação de OTC em tomates.