A A. angustifolia é uma conífera nativa do Brasil e foi intensamente explorada entre as décadas de 30 a 70 do século passado. Tendo assim, reduzida sua área de ocorrência para apenas 2% da área original (Guerra et al., 2002). A embriogênese é uma técnica biotecnológica amplamente utilizada para a propagação massal, melhoramento e conservação genética de várias espécies vegetais (von Arnold, 2002). As poliaminas (PAs) são aminas alifáticas de baixo peso molecular presente nas células vegetais e, durante a embriogênese, elas estão envolvidas em vários processos morfogenéticos e o seu conteúdo endógeno tem sido relacionado com a capacidade embriogênica das culturas em diversas espécies (Bais & Ravishankar, 2002). Elas têm sido associadas a vários processos celulares, tais como a divisão celular, síntese de proteínas, replicação de DNA e respostas a estresses abióticos (Bais & Ravishankar, 2002). Neste trabalho foi avaliado o efeito da adição exógena das poliaminas putrescina (Put), espermidina (Spd) e espermina (Spm) na taxa de indução da embriogênese somática a partir de embriões zigóticos imaturos de A. angustifolia.

Cones femininos imaturos de A. angustifolia foram coletados em plantas pertencentes a uma população natural no município de Bom Retiro-SC, no período de dezembro de 2005 a janeiro de 2006. Os pinhões foram individualizados e submetidos à assepsia, sendo submersos em etanol (70%) por 7 minutos e após em hipoclorito de sódio (2%) por 30 minutos. Em seguida foram realizadas três lavagens com água destilada autoclavada. Em câmara de fluxo laminar, os embriões zigóticos imaturos foram excisados com auxílio de pinças e bisturis sob o estereomicroscópio. Foi utilizado o meio de cultura BM (Gupta & Pullman, 1991) suplementado com L-glutamina (1g.L^-1l), Mio-inositol (1g.L^-1l) e caseína hidrolisada (0,5 g.L^-1l). Foi avaliado o efeito da suplementação das poliaminas: putrescina, espermidina e espermina (0,1 e 0,01µM cada) combinados à sacarose (3%) ou maltose (3%). As poliaminas foram filtroesterelizadas e adicionadas ao meio de cultura após a autoclavagem a 121ºC por 15 minutos. O pH do meio de cultura foi ajustado para 5,8 com NaOH (0,5N) e HCl (0,5N) antes da adição do Phytagel® (2,5g.L^-1). Os explantes foram inoculados em placas de Petri contendo 25ml de meio de cultura, as quais foram incubadas no escuro a 25ºC±2ºC. A avaliação da porcentagem de indução de culturas embriogênicas foi realizada 30 dias após a data de inoculação.

A adição exógena de poliaminas influenciou a taxa de indução das culturas embriogênicas de A. angustifolia. As culturas suplementadas com putrescina apresentaram as mais elevadas taxas de indução, sendo observada a formação de culturas embriogênicas em no mínimo 70% dos explantes inoculados. Em relação à fonte de carbono, foi observada uma maior taxa de indução no meio de cultura suplementado com sacarose (37%), comparativamente aqueles suplementados com maltose (11%). Contudo, a combinação de maltose com Put (0,1mM) e Spm (0,01 mM) resultou em uma taxa média de indução de 85%. Já, as culturas que receberam sacarose e Put (0,1 mM e 0,01mM) apresentaram uma taxa de indução de 95,0% e 92% respectivamente, sendo estes os maiores valores observados neste experimento. Foi observada a inibição da indução de culturas embriogênicas em meios de cultura suplementados com Spm (0,1mM). Em culturas embriogênicas de Pinus oocarpa e Pinus patula atribuiu-se à putrescina o estímulo à divisão celular (Feirer, 1995). A aplicação exógena de poliaminas tem sido um método simples para elevar o conteúdo de PAs, o que é positivamente correlacionado com a capacidade de regeneração de diversas espécies vegetais. Porém, o efeito exógeno das poliaminas não está totalmente elucidado e aparentemente não é o mesmo para as diferentes espécies.

No presente trabalho foram obtidos resultados que demonstram a influência da suplementação de poliaminas ao meio de cultura BM na capacidade de indução das culturas embriogênicas de A. angustifolia.  Estas poliaminas, especialmente Put e Spd, promoveram um incremento na taxa indução das culturas embriogênicas desta espécie. Além disso, o aperfeiçoamento do processo de indução das culturas permite que um número maior de genótipos seja avaliado quanto à capacidade de indução embriogenética, uma vez que as condições de cultivo in vitro foram estabelecidas. Desta forma, futuros trabalhos que avaliem a capacidade das culturas para a formação dos embriões somáticos poderão ser realizados permitindo o aprimoramento dos protocolos de embriogênese somática nesta espécie.