60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

O óxido nítrico é uma molécula diatômica relativamente simples, mas que apresenta diversas propriedades biológicas relevantes, como o efeito vasodilatador, a ação regulatória da adesão plaquetária e a capacidade de garantir a integridade do processo de cicatrização cutânea. Essa importância biológica torna a administração de NO uma alternativa terapêutica consideravelmente promissora. Nesse contexto, o papel dos S-nitrosotióis (RSNOs), moléculas que apresentam a capacidade de liberar NO e que são caracterizadas pela ligação S-N, assume uma incontestável importância. Entretanto, a aplicação farmacológica desses compostos requer, inicialmente, uma melhor compreensão dos fatores que determinam a estabilidade dos mesmos, a qual é extremamente variável e constitui uma função complexa, dependente das condições às quais os RSNOs estão expostos. Dessa forma, o presente estudo visa caracterizar os fatores que interferem na estabilidade dos RSNOs, assim como propor alternativas para ampliá-la significativamente, de modo que essas moléculas, empregadas futuramente em formulações terapêuticas, exerçam suas ações farmacológicas de forma eficiente.

METODOLOGIA:

Ao longo deste estudo, analisou-se a influência de pHs distintos, da exposição à luminosidade, da estocagem a temperaturas diferentes e da presença de íons metálicos sobre a estabilidade de soluções de S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) e S- nitrosoglutationa (GSNO) 1 mmol.L^-1. Os RSNOs estudados foram preparados a partir da nitrosação em meio ácido de seus respectivos tióis (N-acetilcisteína e glutationa). Para a análise da influência do pH da solução sobre a estabilidade destas moléculas, utilizaram-se soluções tamponantes com os seguintes pHs: 3, 5, 7, 9, 11 e 13. Adicionalmente, investigou-se a importância da fotólise sobre a decomposição dos RSNOs, expondo ou não suas soluções à luz ambiente. Já para o estudo da influência térmica sobre a velocidade de decomposição dos RSNOs, analisaram-se as temperaturas de 15, 25, 30, 35 e 40ºC e as amostras foram mantidas em banhos termostatizados. Finalmente, a catálise promovida por traços de íons metálicos em solução foi estudada através da adição ou não de EDTA 0.1% (m/v) às soluções. Todas as conclusões basearam-se nas cinéticas de decomposição dos RSNOs obtidas espectrofotometricamente, a partir da observação da banda de absorção em 336 nm, característica da ligação S-NO dos RSNOs.

RESULTADOS:

A reação de decomposição dos RSNOs está baseada na quebra homolítica da ligação S-N, gerando NO e tiol radicalar (RS^.), o qual é capaz de se combinar e originar dímeros RSSR. Durante este estudo, evidenciou-se a influência do pH na decomposição da SNAC e da GSNO, concluindo-se que pHs extremos, como 3 e 13, são capazes de acelerar tal reação, ao passo que em pH neutro tais compostos apresentam uma estabilidade relativamente maior. O tempo de meia vida varia de 0,45 e 6,9 h em pH 13 para 46 e 52 dias em pH 7, para GSNO e SNAC, respectivamente. Além disso, notou-se a importância da fotólise na decomposição destes compostos, já que a simples exposição à luz ambiente é capaz de catalisar a reação em questão. Também ficou comprovado que a elevação da temperatura reduz a estabilidade dos RSNOs. Finalmente, notou-se que existe uma catálise metálica sobre essa reação de decomposição, uma vez que o acréscimo de EDTA, responsável por remover os possíveis traços de metais presentes em solução, foi capaz de ampliar significativamente a estabilidade das amostras de SNAC e GSNO, mostrando-se a primeira muito mais susceptível a essa catálise, por apresentar um uma velocidade inicial de decomposição de 1,37 x 10^-3 +/- 7 x 10^-4 h^-1 em presença de EDTA e 9,0 x 10^-2 +/- 3 x 10^-4 h^-1 na ausência desse.

CONCLUSÕES:

Através deste estudo, foi possível determinar as variáveis mais relevantes, capazes de influenciar na estabilidade de soluções de SNAC e GSNO e, desta forma, estabelecer as principais condições de preparo e estocagem das mesmas. Os resultados obtidos permitem estabelecer as condições necessárias para garantir a maior durabilidade dos RSNOs, descoberta importante caso os mesmos venham a ser empregados como princípios ativos de futuras formulações terapêuticas, uma vez que estudos já evidenciaram que os compostos estudados possuem ação biológicas relevantes. Os experimentos realizados evidenciaram que os RSNOs devem ser preparados em soluções de pH neutro e tamponado para evitar a decomposição acelerada em pHs ácidos e básicos. Todas as soluções devem estar livres da presença de íons metálicos, o que pode ser feito a partir do acréscimo de quelantes como EDTA, que removam os traços metálicos. A estocagem destas soluções deve ser feita ao abrigo da luz, a fim de evitar a fotólise e a temperaturas baixas, com o objetivo de tornar ainda mais lento o processo de decomposição dos RSNOs. Uma vez obedecidos os critérios acima, a GSNO e a SNAC poderão ser consideradas relativamente estáveis e utilizadas terapeuticamente, com eficiência garantida através da integridade de suas moléculas.

Instituição de fomento: FAPESP

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: Óxido nítrico, S-nitrosotióis, Decomposição

E-mail para contato: jaquelinedenadai@yahoo.com.br