60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Leishmaniose é uma doença tropical causada pelo protozoário do gênero Leishmania. A ausência de um efetivo medicamento levou a investigação de fontes naturais para o desenvolvimento de compostos com efetiva ação nesta patogenia. Na busca por novos fármacos, avaliamos o potencial leishmanicida de metabólitos secundários de plantas sobre as formas promastigotas de Leishmania(V.)braziliensis Leishmania amazonensis. A família Annonaceae é usada na medicina popular como antitumoral, antidiarreica e antiparasitária. Além disso, algumas espécies desta família, principalmente dos gêneros Annona, Guateria e Uvária têm mostrado atividade antiprotozoária, especialmente contra parasitas causadores da malária, doença de Chagas e leishmaniose. Em face disso, o presente projeto visa o estudo químico de espécies de plantas do gênero Annona encontradas na região Amazônica, bem como, avaliar o potencial farmacológico destas, enfatizando a atividade leishmanicida. Para isso, folhas e caules foram coletados e submetidos a processos de extração e purificação dos metabólitos secundários, através de metodologias usuais de estudos fitoquímicos. Os extratos, frações e compostos isolados foram submetidos a ensaios leishmanicidas in vitro.

METODOLOGIA:

O material botânico (caules e folhas) das espécies Annona sericia e A. amazônica foram coletados no campus da Universidade Federal do Amazonas(UFAM) na Reserva Florestal Adolpho Ducke. Os extratos obtidos após secagem em estufa de ar circulante (45&grauC) e pulverização em moinho de facas foram submetidos a etapas de purificação através de técnicas cromatográficas em coluna e camada delgada preparativa. Os compostos foram identificados através das técnicas espectroscópicas de Ressonância Magnética Nuclear (1D e 2D), Espectrometria de Massas e Infravermelho nos Laboratórios de Síntese Orgânica e Ressonância Magnética Nuclear da Universidade Federal do Paraná. Os ensaios biológicos foram realizadas em formas promastigotas de L.(V.)brasiliensis cultivadas em meio Schneider`s suplementado com soro bovino fetal 10% (v/v), temperatura de 25&grauC e pH 7.2. Os extratos ou metabólitos secundários das plantas utilizadas foram adicionadas na cultura de parasitas com 4x106 células promastigotas/mL nas concentrações de 320 até 0,125µg/mL em dimetilsulfoxido e incubadas a 25&grauC. Após 24 horas de incubação os parasitas remanescentes foram contados em câmera de neubauer e o percentual de inibição calculado por comparação com os controles. O valor da LD₅₀/24h foi determinado pela regressão linear do percentual de inibição usando um limite de erro estatístico de 10%. Os testes foram feitos em triplicata e usando isetionato de pentamidina como fármaco de referencia sendo realizados na Universidade Estadual de Maringá.

RESULTADOS:

A avaliação da atividade biológica do extrato metanólico frente a Leishmania amazonensis, revelou uma DL₅₀ superior a 320,0 µg/mL. Por outro lado, a fração enriquecida em alcalóides apresentou DL₅₀ de 297,0 µg/mL, evidenciando que esta atividade pode estar relacionada a presença de alcalóides. Desta forma, a fração alcaloídica foi submetida a separação cromatográfica, inicialmente através de uma coluna cromatográfica de sílica gel, previamente tratada com solução NaHCO₃ 10%, usando como fase móvel gradientes de CH₂Cl₂ em hexano, EtOAc em CH₂Cl₂ e MeOH em EtOAc. As frações eluídas da coluna foram analisadas e reunidas por CCDA, evidenciando a presença de alcalóides quando reveladas em reagente Dragendorff. Adicional separação cromatográfica das frações por cromatografia de camada delgada preparativa resultou no isolamento de dois alcalóides oxoaporfínicos, oxonuciferina ou lisicamina e nornuciferina. O alcalóide nornuciferina mostrou uma atividade leishmanicida para as concentrações de 320, 160 e 80µg/mL percentuais de inibição de 97,1, 96,9 a 74,3 respectivamente.

CONCLUSÕES:

Atualmente, a busca por substâncias bioativas de plantas é a esperança mais concreta para a cura de diversos males e um dos caminhos mais promissores para a obtenção de novos medicamentos. Neste contexto, a região Amazônica, devido a sua grande biodiversidade, além de abrigar a mais notável e diversificada fonte de produtos naturais, apresenta uma riqueza de variedades vegetais capazes de gerar produtos aplicáveis em diversos setores. Portanto, pesquisas em produtos naturais são necessárias para o fornecimento de informações científicas que conduzam ao desenvolvimento de produtos terapêuticos, tão essenciais para o combate às doenças. Assim a presença dos alcalóides como a nornuciferina em folhas de Annona sericea poderão contribuir para o tratamento da leishmaniose. Os percentuais de inibição do alcalóide em formas promastigotas de L.(V.)braziliensis foram 97,1, 96,9 a 74,3 respectivamente. Desta maneira Annona sericea mostra significante potencial para a atividade antileishmania já demonstrada em L. amazonensis para a fração alcaloídica com DL₅₀ de 297,0 µg/mL. Estudos químicos biomonitorados estão sendo realizados para o isolamento e caracterização dessas substâncias, e futuras elucidações das propriedades farmacológicas e toxicológicas justificando a continuação das investigações na busca por metabólitos biologicamente ativos.

Instituição de fomento: Fundação Araucária

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: Leishmania, Leishmanicida, Annona sericea

E-mail para contato: carol_kaky@hotmail.com