C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 3. Biologia Geral
ESTUDOS FUNCIONAIS E ESTRUTURAIS DO FRAGMENTO C-TERMINAL DA PROTEÍNA HUMANA CLASP2 EM INTERAÇÃO COM FEZ1.
Camila Haynes Abrille1, 3
Daniel Carlos F. Lanza1, 2
Jörg Kobarg1, 2
1. Laboratório Nacional de Luz Síncrotron, CEBIME – Campinas, SP, Brasil.
2. Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, SP, Brasil.
3. Pontifícia Universidade Católica de Campinas, Campinas, SP, Brasil.
INTRODUÇÃO:A proteína humana CLASP2 (CLIP Associated Protein 2), foi identificada por sua interação com proteínas CLIP, e têm funções associadas ao citoesqueleto e a processos de transporte de microtúbulos. Ela se localiza nas extremidades plus dos microtúbulos e no complexo de golgi, sendo responsável pela ativação de centros de formação de microtúbulos (MTOCs), além de estar envolvida em processos de divisão celular. Em estudos anteriores de duplo híbrido realizados pelo nosso grupo identificou-se a interação da região C-terminal da CLASP2 com FEZ1, uma proteína que atua na polarização e diferenciação neuronal. O fragmento da proteína CLASP2 que interage com FEZ1 (aminoácidos 1192-1407), que codifica uma porção estruturada dessa proteína, foi sub-clonado em vetores de expressão em bactérias (pET28-Tev-6xHis) e em células humanas (pDsRed), a fim de realizar estudos estruturais e funcionais em conjunto com FEZ1.METODOLOGIA:A partir da construção inicial de CLASP2 foram feitos testes de expressão em diferentes condições de temperatura e concentração de IPTG. Foram feitas clonagens do fragmento (1192-1407) de CLASP2 nos vetores pDs RED e pET28A TEV 6xHis para localização celular e expressão respectivamente.RESULTADOS:A melhor condição para a expressão de GST-CLASP2 (1192-1407) foi determinada. A localização sub-celular de RED-CLASP2 (1192-1407) em HEK293 foi analisada, e a interação com FEZ1 foi confirmada em células humanas.CONCLUSÕES:Os resultados mostram que CLASP2 (1192-1407) é predominantemente citoplasmática e localiza-se também em uma região candidata ao centrossomo.
Instituição de fomento: FAPESP, LNLS e CNPQ.
Trabalho de Iniciação Científica
Palavras-chave: Transporte celular, Proteínas associadas a microtúbulos, Ativação de MTOCs
E-mail para contato: camila_haynes@yahoo.com.br
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