60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Espécies dos gêneros Melipona e Scaptotrigona são abelhas sem ferrão, pertencentes à subfamília Meliponinae (Gallo et al., 2002) que provêm evolutivamente de um grupo de vespas que deixaram de transmitir caracteres genéticos para a formação do ferrão a seus descendentes (Alonso, 1998). As abelhas sem ferrão estão bem distribuídas no Brasil, são de grande importância ecológica (Kerr et al., 1996) e com algumas diferenças em suas características biológicas. As esterases apresentam amplo papel funcional, são determinadas por vários locos gênicos e apresentam diferenças de expressão dependendo da parte do corpo e da fase de desenvolvimento do inseto. Dessa maneira, a caracterização dessas isozimas em adultos de Scaptotrigona postica e Melipona quadrifasciata permitirá aumentar o conhecimento sobre o papel dessas enzimas no metabolismo desses insetos e poderá contribuir com o entendimento da evolução desses dois grupos de abelhas sem ferrão.

METODOLOGIA:

Indivíduos adultos destes dois gêneros foram coletados na cidade de Mandaguari, sacrificados e estocados a -20°C, pelo menor espaço de tempo possível. 48 operárias mandaçaia de 6 colméias e 40 operárias de um ninho natural de S. postica foram submetidos à eletroforese para caracterização das esterases. Foram separados cabeça e tórax do abdômen, macerados individualmente em 120μL de tampão Tris-HCl 0,375 M pH 8,8 e glicerol a 10% e centrifugados por 5min, 25.000 rpm. Foram aplicados 20μL do sobrenadante de cada amostra em gel de poliacrilamida (T= 30,8 %; C = 2,6 %) a 10% com gel de empilhamento (T= 10.5 %; C = 4,8 %). A corrida eletroforética foi realizada com tampão Tris-glicina 0,1M pH 8,3 por 5h e 30min, 200V à 5ºC. Em seguida o gel foi incubado em 50mL de tampão fosfato 0,1M pH 6,2 por 30min. Posteriormente, foi utilizada coloração para esterase com 0,03g de β-Naftil-acetato, 0,03g de α-Naftil-acetato, 1 mL de acetona, 50 mL de tampão fosfato sódio pH 6,2 e 0,06g de fast blue RR salt. Após a coloração o gel foi mantido em solução conservante (ácido acético-75mL, glicerol-50mL e água destilada-1000 mL) por pelo menos 2 horas. A secagem foi realizada colocando o gel entre dois papéis celofane e gelatina 5%.

RESULTADOS:

Em extratos de S. postica foram detectadas 6 regiões de atividade esterásica, enquanto que em extratos de M. quadrifasciata foram encontradas apenas 5 esterases. Em ambos os casos as esterases foram denominadas numericamente, sendo EST-1 a que apresentou maior mobilidade eletroforética. Em S. postica a EST-6 foi caracterizada como β-esterase, pois apresentou coloração vermelha quando corada com  e β-naftil acetato juntos. As demais esterases são β-esterases, por terem apresentado coloração intermediária entre preto e vermelho quando coradas com  e β-naftil acetato juntos. Em M. quadrifasciata a EST-1 foi caracterizada como β-esterase. As demais esterases são β-esterases. Foi detectado polimorfismo para a esterase-6, em Scaptotrigona sp. e para Est-1, em Melipona quadrifasciata, tendo sido observado os dois tipos de homozigotos (lento e rápido) e os heterozigotos. Os heterozigotos apresentaram padrão de duas bandas, permitindo inferir que essa isozima possui estrutura quaternária monomérica. Em S. postica não foram observadas esterases específicas para diferentes partes do corpo, enquanto em M. quadrifasciata foi observado que a Est-3 e a Est-4 são específicas do abdômen, pois foram detectadas apenas nesses extratos.

CONCLUSÕES:

As abelhas sem ferrão S. postica apresentam 6 esterases sendo que a EST-6 é uma β-esterase e as demais αβ-esterases. As M. quadrifasciata apresentaram 5 esterases, das quais apenas EST-1 é β-esterase e as demais αβ-esterases. Em Melipona quadrifasciata foi observada expressão diferencial das esterases, pois as esterases 3 e 4 foram específicas do abdômen.

Instituição de fomento: Universidade Estadual de Maringá

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: Scaptotrigona postica, Melipona quadrifasciata, perfil eletroforético

E-mail para contato: diana.lafarias@gmail.com