C. Ciências Biológicas - 9. Imunologia - 1. Imunologia Aplicada
DETECÇÃO, POR ABORDAGEM MOLECULAR, DO PEPTÍDEO ANTIMICROBIANO PENEIDINA NAS CÉLULAS IMUNOCOMPETENTES DO CAMARÃO FARFANTEPENAEUS SUBTILIS
Mariana Borsa4
Rafael Diego da Rosa4
Margherita Anna Barracco4
4. Laboratório de Imunologia Aplicada à Aquicultura - UFSC
INTRODUÇÃO:Peptídeos antimicrobianos (PAM) são componentes essenciais do sistema imune inato de vertebrados, invertebrados e plantas. Dentre os PAM de crustáceos destacam-se as peneidinas que apresentam atividade contra um amplo espectro de microrganismos, incluindo bactérias Gram positivas e fungos filamentosos. O objetivo do presente trabalho foi o de detectar, clonar e caracterizar molecularmente seqüências semelhantes a peneidinas nas células da hemolinfa do camarão nativo Farfantepenaeus subtilis, encontrado na região Nordeste do Brasil.METODOLOGIA:A hemolinfa dos camarões foi obtida através de punção direta da região ventral na presença de uma solução anticoagulante. Os hemócitos foram isolados por centrifugação e utilizados para extrair RNA total (Trizol) e obtenção de cDNA (transcriptase reversa). Para a detecção de peneidinas foi desenhado um par específico de iniciadores a partir de regiões de consenso de seqüências já conhecidas. A amplificação de seqüências gênicas correspondentes a peneidinas foi realizada através da técnica de PCR (reação em cadeia da polimerase) e os produtos amplificados foram examinados em gel de agarose 1,5%, corado com brometo de etídeo.RESULTADOS:Devido à alta similaridade com isoformas de peneidinas pertencentes ao grupo 2, a seqüência obtida em F. subtilis foi classificada como peneidina 2, isoforma 1 (Farsub PEN2-1). O cDNA de Farsub PEN2-1 possui uma ORF (open reading frame) de 219 pb que codifica para um peptídeo de 73 aminoácidos. Análises através do programa SignalP indicaram a presença de um peptídeo sinal de 19 aminoácidos, sendo o peptídeo maduro de 54 aminoácidos. Assim como as demais seqüências de peneidinas, a forma madura de Farsub PEN2-1 possui uma região rica em resíduos de prolina na região amino-terminal e 6 resíduos de cisteína na região carboxi-terminal.CONCLUSÕES:Comparando-se a seqüência aminoacídica deduzida da PEN2-1 de F. subtilis com outras peneidinas, verificou-se um alto grau de similaridade com diferentes isoformas de PEN2 de F. paulensis (91-93%) e de L. vannamei (73%). Este foi o primeiro relato da presença de peneidinas na espécie de camarão peneídeo nativo F. subtilis.
Trabalho de Iniciação Científica
Palavras-chave: peneidina, camarão peneídeo nativo, clonagem molecular
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