60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

A metaciclogênese em Trypanosoma cruzi, diferenciação das formas epimastigotas replicativas em tripomastigotas metacíclicas infectivas, é uma etapa do ciclo de vida deste parasita extremamente importante e amplamente estudada por ser um processo onde muitas alterações morfológicas e metabólicas estão ocorrendo. O estudo da expressão gênica durante a metaciclogênese é essencial para compreender estas alterações, bem como este processo de diferenciação em si. A partir de ensaios de hibridação em microarranjos de DNA de T. cruzi, foi possível identificar um grupo de genes de expressão diferenciada durante a metaciclogênese. Vários destes genes não têm função conhecida e muitos nunca foram estudados funcionalmente em T. cruzi. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a expressão das proteínas correspondentes a seis destes genes durante a metaciclogênese (Tc00.1047053: 510445.50, S-adenosilmetionina sintetase/ 506443.70, glutationa-S-transferase/ 509213.70, ribulose-5-fosfato-epimerase/ 510039.40, provável nitrilase/ 504057.97 e 506695.40, proteínas hipotéticas conservadas). E, desta forma, contribuir para a investigação de suas funções neste processo de diferenciação celular.

METODOLOGIA:

Assim, estes genes foram clonados, suas proteínas foram expressas em sistemas bacterianos, purificadas e inoculadas em camundongos para a produção de anticorpos policlonais. Estes anticorpos foram utilizados em ensaios de Western blot contendo extratos protéicos de T. cruzi isolados em diferentes fases da metaciclogênese e de localização celular ao longo deste processo de diferenciação.

RESULTADOS:

As proteínas S-adenosilmetionina sintetase, glutationa-S-transferase e a provável nitrilase apresentaram uma redução de expressão durante a metaciclogênese, enquanto a ribulose-5-fosfato-epimerase apresentou um aumento na sua expressão. Estes resultados confirmaram as tendências observadas nos ensaios de hibridação em microarranjos de DNA. Por outro lado, nenhum resultado de expressão foi observado para as proteínas hipotéticas conservadas, o que poderia indicar que estas proteínas não estão sendo expressas nas formas epimastigotas e metacíclicas de T. cruzi ou que os anticorpos não são capazes de reconhecer as formas nativas destas proteínas. Os ensaios de imunolocalização indicam a presença da provável nitrilase no flagelo das formas epimastigotas. Os resultados de localização das outras três proteínas são preliminares e precisam ser confirmados.

CONCLUSÕES:

Este trabalho permitiu iniciar a caracterização da expressão destes genes diferencialmente expressos durante a metaciclogênese. Esta caracterização deverá ser ampliada pela transferência dos genes estudados para vetores de fusão, os quais permitirão a expressão regulada ou associada a marcadores, em T. cruzi, destas proteínas. O que permitirá um melhor entendimento de seu papel durante o disparo, manutenção e regulação da metaciclogênese.

Instituição de fomento: Fundação Araucária, CNPq

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: T. cruzi, metaciclogênese, regulação da expressão gênica

E-mail para contato: ligia_kalb@hotmail.com