60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Os streptococcus mutans (S. mutans) se relacionam de forma indubitável com o aparecimento das lesões de cárie, e suas concentrações na saliva são utilizadas como fator predictivo de risco à cárie. A melhor forma para o seu controle são os recursos mecânicos, mas reconhecendo a dificuldade de higiene presente nos pacientes submetidos ao tratamento com aparelho ortodôntico fixo, a utilização dos agentes antimicrobianos é de grande valia. A introdução de inúmeras superfícies de retenção na cavidade oral, contribuem de forma importante para o acúmulo de biofilme bacteriano. Os fatores ambientais desempenham papel importante na regulação da fisiologia e da virulência associados aos S. mutans e pouco se sabe dos mecanismos moleculares que regulam a expressão destes genes de virulência em resposta às flutuações em seu ambiente. Desta forma, estes pacientes são acometidos de modificações na microbiota oral e várias são as possibilidades que fazem com que S. mutans se tornem resistentes a antimicrobianos. Genes envolvidos em resistência já foram identificados (fxpA, fxpC, rgpA, teto, tetl, hk11 e rr11), muitos desses em elementos genéticos móveis. A existência de tais fatores em microrganismos de pacientes submetidos a tratamento com aparelho ortodôntico fixo, podem ser avaliados e comparados com outros parâmetros.

METODOLOGIA:

Estudo transversal, utilizando sete amostras de S. mutans isoladas de pacientes submetidos a tratamento ortodôntico fixo em diferentes estágios (6, 8, 9, 10, 12, 20, 33 meses). Avaliado e aprovado no CEP/HU/UFS. A coleta das amostras foi realizada com swab estéril conservado em gelo e processado em capela de fluxo laminar em no máximo quatro horas. Realizado esgotamento por estrias em meio de cultura: agar mitis salivarius (Acumedia, USA), suplementado com sacarose (15%) e bacitracina (0,2UI/mL). Seguido de incubação em jarras de anaerobiose com Anaerogen - OXOID por 72 horas a 37ºC. A extração do DNA foi realizada através da técnica do fenol-clorofórmio com a finalidade de isolar e purificar o DNA molde das colônias bacterianas de S. mutans para as reações em cadeia pela polimerase (PCR). Os iniciadores sintéticos (primers) foram desenhados utilizando seqüências dos genes (fxpA, fxpC, rgpA, teto, tetl, hk11 e rr11) depositadas no Gene Bank. No termociclador, 35 ciclos térmicos foram realizados em três estágios: desnaturação do DNA à 95°C por 1 min.; anelamento Primer-DNA a 54 °C por 1 min. e extensão (síntese) à 72°C por 1,5 min.. A corrida eletroforética foi realizada em gel de agarose 2% em tampão Tris-Borato EDTA 0,5X por cerca de 45 minutos a 100 V. A visualização das bandas após imersão do gel em solução de brometo de etídio (0,5 u/mL) por 15 minutos e exposição do gel à luz ultra-violeta emitida por transiluminador (Pharmacia LKB – MacroVue).

RESULTADOS:

As reações de PCR foram padronizadas e os ciclos térmicos foram capazes de gerar fragmentos específicos com tamanhos esperados para os respectivos genes em estudos. Pela análise do gel, os produtos amplificados obtidos têm tamanho da ordem de pares de base, o que satisfaz a expectativa da análise computacional para os pares de primers e confirma que os produtos obtidos foram gerados a partir de DNA bacteriano. Observando também que a presença dos genes de virulência aumenta de acordo com o maior tempo de tratamento ortodôntico.

CONCLUSÕES:

Os iniciadores sintéticos amplificaram com sucesso os genes fxpA, fxpC, rgpA, hk11, tetO e tetL. Foi possível avaliar o incremento da presença de genes de resistência avaliados no decorrer do tempo de tratamento, indicando a seleção de amostras de S. mutans com virulência diferenciada. Pacientes submetidos a tratamento ortodôntico fixo têm a sua microbiota da cavidade bucal alterada possibilitando a seleção de S. mutans resistentes. Novos experimentos devem ser desenvolvidos para melhor avaliar a importância da inter-relação entre a presença do gene e a sua expressão, associando à produção de cárie e doença periodonta

Instituição de fomento: COPES – UFS/CNPq Trabalho de iniciação científica

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: S. mutans, ortodôntico, gene

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