60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Pueraria phaseoloides (Rox.) Benth nome comum Kudzu tropical é uma planta leguminosa forrageira, cujos caules são longos, finos e verdes, suas folhas medem de 8 a 10cm de largura por 8 a 12 cm de comprimento e multiplicam-se por sementes que apresentam coloração marrom medindo aproximadamente 2mm de comprimento por 2mm de largura. Estudos anteriores, relatam que esta espécie apresenta potencial na produção de isoflavonóides com ação alelopática. A concentração desses isoflavonóides na planta no ambiente natural não são suficientes para o desenvolvimento de um trabalho experimental a nível piloto, neste sentido, aplicou-se técnicas da biotecnologia vegetal para cultivar células na forma de callus em quantidades que sejam manipuláveis e se induza a produção destas substâncias in vitro de forma que se possa obter concentrações maiores do que a planta produz no campo.

METODOLOGIA:

Utilizaram-se sementes de Pueraria phaseoloides e aplicaram-se técnicas assépticas, utilizando-se etanol/água 70%v/v por 1 minuto e hipoclorito de sódio a 2% v/v por 15 minutos. Posteriormente, as sementes foram transferidas para frascos de cultura contendo meio Agar (1% m/v), água e sacarose (3%m/v) para sua germinação. Os frascos foram armazenados em câmaras de germinação em total presença de luz a uma temperatura de 26°C. Para a indução dos callus foram utilizadas plântulas cultivadas in vitro a apartir das sementes. Os explantes devidamente preparados, foram transferidos para o meio de cultura básico MS (Murashige e Skoog, 1962), sacarose 30g.L-1, agar a 1%m/v, e reguladores de crescimento BAP e 2,4-D ambos em concentrações na faixa de 0,5mg/L-1. O cultivo foi mantido no escuro em câmara de germinação por 50 dias a uma temperatura de 28°C. Os isoflavonóides foram identificados via HPLC.

RESULTADOS:

Os resultados mostraram que a indução de callus em explantes de plântulas cultivadas in vitro é mais rápida e possível a partir do quarto dia. Obteve-se callus com índice de crescimento de biomassa 10 vezes maior que os inóculos, e busca-se melhorar a manipulação do meio para que possa produzir essas células não diferenciadas em menor intervalo de tempo. A concentração de 0,5mg/mL de BAP e 2,4-D observou-se o melhor crescimento dos callus, assim como, a produção dos metabólitos ocorrendo mudança de coloração. A partir das análises realizadas em HPLC foi possível observar a semelhança dos cromatogramas das partes aéreas da planta no campo com o extrato metanólico dos callus, confirmando assim, a presença desses metabólitos.

CONCLUSÕES:

Foi possível estabelecer o processo com o cultivo de células para obtenção de biomassa e induzir a produção de metabólitos com concentrações maiores do que a planta produz no campo, em menor espaço de tempo, onde o isoflavonóide acumulado poderá ser utilizado como padrão nos estudos de atividades. Desta forma, os resultados apontam para um sistema possível de otimização.

Palavras-chave: Pueraria, callus, isoflavonóides

E-mail para contato: silvanaraujo@ufpa.br