60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Atualmente, a maior causa de perda dental nas sociedades ocidentais é a periodontite. Essa, é uma desordem inflamatória que afeta os tecidos de suporte dos dentes e que da fase aguda torna-se crônica. O acúmulo de bactérias sobre a superfície dos dentes desencadeia a doença, porém seu agravamento e severidade são dependentes de fatores como a genética do hospedeiro, condição de saúde sistêmica e hábitos como fumar. A presença de metilação no DNA em regiões CpG em promotores de genes pode promover elevação ou supressão dos níveis de transcrição, podendo até mesmo silenciar totalmente a expressão genética. Já foi demonstrado que o fumo causa aumento na síntese de algumas citocinas da inflamação, entre elas, a interleucina-8 (IL-8), importante agente quimiotático, sendo a principal molécula atrativa de neutrófilos. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o padrão de metilação no DNA na região promotora do gene da IL-8 em células bucais de indivíduos saudáveis e com periodontite crônica fumantes e não-fumantes a fim de associar o padrão de metilação nessas células com ausência ou presença da inflamação.

METODOLOGIA:

Células da mucosa bucal de indivíduos saudáveis e de pacientes com periodontite crônica fumantes e não fumantes (Aprovado Comitê de Ética-protocolo176/2006) foram coletadas a partir de um bochecho com dextrose 3% e o DNA foi purificado utilizando solução de acetato de amônio 8M. O DNA purificado foi então modificado pelo bissulfito de sódio, cujo princípio está em transformar citosina não- metilada em uracila sem provocar alteração em citosina metilada. 1 µg de DNA foi denaturado por NaOH (0,2 M) durante 30 min a 42°C, seguido de incubação com 500µL de hidroquinona 0,2M e bissulfito de sódio 5,2M pH 5,0 durante 18 h à 55°C. DNA já modificado pelo bissulfito de sódio foi purificado utilizando kit Wizard SV Gel and PCR Clean- Up System (Promega) e estocado à -70°C. As diferenças nas seqüências de DNA após tratamento com bissulfito de sódio foram detectadas pela técnica de MSP (Methylation Specific PCR). As amostras da PCR foram então corridas em eletroforese em gel de poliacrilamida 10% seguido de coloração pelo SYBR Gold. A análise estatística foi realizada no software Bioestat 5.0 utilizando o teste de c2 e teste de variância de Friedman com nível de significância de 5%.

RESULTADOS:

Nossos resultados mostram que todos os indivíduos do grupo controle apresentam positividade para as condições metilada e não- metilada no gene da IL-8, enquanto que 50% e 85% dos indivíduos do grupo periodontite fumante e periodontite não fumante mostram hipometilação para o gene da IL-8 respectivamente. As diferenças entre os grupos controle e periodontite foram estatisticamente significantes (teste x p = 0,05), principalmente quando comparamos o grupo controle com o grupo periodontite não fumante (teste x p = 0,038). A análise da intensidade das bandas revelou uma diferença na qualidade das mesmas, havendo diferença entre a qualidade das bandas para a condição metilada encontrada no grupo controle versus grupo periodontite não-fumante (Teste de Friedman p < 0,05).

CONCLUSÕES:

Nossos resultados indicam que os indivíduos com periodontite crônica independente do hábito de fumar apresentam um percentual de hipometilação no gene da IL-8 maior que os indivíduos controles, sugerindo que a inflamação na mucosa bucal pode promover alterações no padrão de metilação da IL- 8 nessas células.

Instituição de fomento: CNPQ 141592/2007-9, FAPESP 07/02488-0

Palavras-chave: fumo, epigenética, periodontite

E-mail para contato: naila_francis@yahoo.com.br