60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Atualmente o grupo do IBMP está desenvolvendo um programa de Genômica Estrutural do Trypanosoma cruzi, de forma a permitir que, a partir dos dados de estrutura cristalográfica das proteínas hipotéticas ou hipotéticas conservadas, se possa determinar a função destas proteínas. Diversos genes tidos como diferencialmente expressos na metaciclogênese, através de experimentos de microarranjo, foram selecionados para o presente trabalho. Tendo em vista a presença de duas linhagens principais em T. cruzi, genotipica e fisiologicamente distintas, e as diferenças entre a cepa utilizada por nós, Dm28c (T. cruzi I), e a cepa da qual se obteve o genoma de T. cruzi, CL Brener (T. cruzi II), é necessário a comprovação da seqüência de todos os genes utilizados no Projeto Genômica Estrutural de T. Cruzi para que possamos saber a correta seqüência de aminoácidos nas proteínas que desejamos estudar. Assim sendo, o presente trabalho teve como objetivo seqüenciar os 192 genes selecionados para o Projeto Genômica Estrutural de T. cruzi, utilizando o clone Dm28c, e comparar as seqüências obtidas com os dados fornecidos pelo Projeto Genoma de T. cruzi para o clone CL Brener, em nível gênico e protéico.

METODOLOGIA:
Os genes foram amplificados por PCR, purificados e sequenciados por amplificação com nucleotídeos terminadores de cadeia seguido de análise das sequências num sequenciador automático ABI PRISM - 3100 Genetic Analizer. As seqüências obtidas para os 192 genes foram analisadas no programa Phred-Phrap-Consed, e alinhadas com órtologos de T. cruzi (cepa CLBrener), T. brucei e Leishmania major nos programas ClustalW e DIALIGN. As análises filogenéticas foram realizadas com ajuda do programa DNADist (método de distância) presente no pacote PHYLIP (“PHYlogeny Inference Package”). As árvores filogenéticas produzidas foram visualizadas com ajuda do programa TreeView.

RESULTADOS:
Observou-se três padrões distintos de alinhamentos: genes únicos de T. cruzi; genes com um ortólogo em T. cruzi e somente um ortólogo em T. brucei e L. major; genes com diversos ortólogos em T. cruzi, T. brucei e L. major, as famílias gênicas. Devido a expressão diferencial destas proteínas hipotéticas durante a metaciclogênese de T. cruzi, diferentes funções específicas podem ser atribuídas a cada um destes três grupos de genes de acordo com padrões evolutivos dos mesmos.

CONCLUSÕES:
Os alinhamentos gênicos e protéicos com genomas de Tritryps corroboram estudos filogenéticos prévios que demonstram o relacionamento evolutivo entre tais tripanossomatídeos, além de reafirmarem a presença de duas linhagens distintas em T. cruzi. O presente trabalho também demonstra que o genoma da cepa referência CL Brener não cobre a grande diversidade intra-específica de T. cruzi.

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, linhagens, diversidade

E-mail para contato: polacokessler@hotmail.com