60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

Leishmania amazonensis é o agente causador de leishmaniose cutânea difusa e também pode causar leishmaniose cutânea disseminada. A infecção começa com a inoculação de promastigotas, através da pele de mamíferos durante o repasto sanguíneo do inseto vetor infectado. No novo ambiente, promastigotas são fagocitados pelos macrófagos teciduais, onde se transformam em amastigotas. Os tratamentos atualmente existentes são custosos, ineficazes e muito tóxicos, por isso diversos estudos biológicos e químicos têm sido realizados na busca da droga ideal. Dentre os compostos alvos de estudos estão os derivados tetraidro-beta-carbolínicos, os quais já se mostraram efetivos em diversos estudos anteriores. No presente estudo investigou-se o efeito de um derivado tetraidro-beta-carbolínico na morfologia e na ultraestrutura dos parasitas (tratados ou não) através da microscopia óptica e eletrônica de varredura. Ainda, observou-se o efeito desse composto na interação de promastigotas e macrófagos.

METODOLOGIA:

O derivado tetraidro-beta-carbolínico: cis-tetraidro-Β-carbolina-1(m-nitrofenil)-3-carbometóxi (denominado de composto 14) foi sintetizado no Departamento de Química da Universidade Estadual de Maringá. Interação de promastigotas e macrófagos: Macrófagos J774 foram tratados, por 20 min, com 10 e 50 μg/ml da droga, e a seguir interagidos com promastigotas de L. amazonensis (cepa WHOM/BR/75/JOSEFA) por 24 h. Além disso, realizou-se a interação, por 60 min., do parasita-macrófago previamente à adição do derivado. Após, o composto químico foi adicionado e deixado agir por 24 h. Em todos os casos as culturas foram incubadas em estufa de CO₂, 37ºC. A seguir, foram fixadas com o fixador de Bouin, coradas com Giemsa e visualizadas em microscópio fotônico comum. O índice de internalização foi obtido multiplicando-se o percentual de células infectadas e o número médio de parasitas por célula. Microscopia eletrônica de varredura: Promastigotas não tratadas e tratadas com 50 μg/ml e 100 μg/ml do derivado 14 foram centrifugadas, lavadas, fixadas e aderidas em um “chip” (tratado com poli L-lisina). Após lavagem em tampão cacodilato o material foi desidratado em concentrações crescentes de etanol e submetido ao ponto crítico em CO2, metalizado em ouro e observado ao microscópico eletrônico de varredura (Shimadzu SS550). Microscopia óptica comum: Em paralelo, esfregaços de parasitas tratados e não-tratados foram corados através do método de Giemsa para a análise morfológica.

RESULTADOS:

Através da microscopia ótica verificamos a presença de dois ou mais núcleos em 26,3% dos promastigotas tratados sendo que somente 2% dos parasitas não-tratados apresentaram-se com dois ou mais núcleos. Por meio da microscopia de varredura, pudemos confirmar que, na concentração de 50 μg/ml, o derivado provocou leve arredondamento das formas promastigotas, mas em concentrações mais elevadas o arredondamento das células ficou mais evidente apresentando também o encurtamento ou até mesmo o desaparecimento do flagelo. O pré-tratamento dos macrófagos com a droga ocasionou uma redução na internalização, sugerindo que o composto 14 poderia inibir o reconhecimento do parasita e/ou a penetração no macrófago. Além disso, após 1 h de interação, macrófagos-parasitas tratados por 24 h com a droga, também resultou em um decréscimo do índice de internalização.

CONCLUSÕES:

Os resultados obtidos com o derivado 14 mostraram que este composto químico foi capaz de alterar a morfologia do parasita (flagelos, corpo celular) e interferir no processo de divisão celular de formas promastigotas. Os dados obtidos sugerem também que o composto 14 pode atuar no processo de fagocitose dos parasitas e/ou interferir no desenvolvimento das formas amastigotas no interior do vacúolo parasitóforo. Entretanto, estudos adicionais serão necessários para elucidar o modo de ação do derivado sobre o parasita e na interação parasita-hospedeiro.

Instituição de fomento: CNPq (bolsa PIBIC), PRONEX/Fundação Araucária, FINEP e Pró-reitoria de Pesquisa e Pós-graduação

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: derivado tetraidro-beta-carbolínico, ultraestrutura, atividade antileishmania

E-mail para contato: patycinha0308@hotmail.com